Cpx信号转导系统是革兰氏阴性细菌中普遍存在的双组分系统,由膜蛋白组氨酸激酶CpxA和胞质反应调节蛋白CpxR组成。该系统参与致病性大肠杆菌毒力基因的表达,而在胡萝卜软腐果胶杆菌中的作用尚未见报道。本研究的目的是构建CpxR蛋白的体外表达菌株,获得高纯度的蛋白,并初步探索晶体生长条件。本研究以胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种PC1为出发菌株,从其基因组中扩增cpxR基因,克隆到pET-15b载体,测定基因序列。利用生物信息学技术分析基因序列,结果显示该基因大小为699 bp,编码232个氨基酸,分子量大小为26.4 kDa,等电点为5.23,含有REC和HTH两个结构域,没有跨膜区,位于细胞质,其二级结构主要由α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲构成,还有少量的β-转角。利用KEGG数据库检索蛋白功能,发现CpxR参与双组份信号转导和细菌抗药机制相关基因的表达。为进一步揭示CpxR蛋白的结构与其生物功能间的联系,本研究将带有组氨酸标签(His-tag)的原核表达载体pET-15b-CpxR转入大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,利用IPTG诱导蛋白表达,并优化IPTG的最佳诱导浓度为0.5 mmol/L。利用多聚组氨酸标签的性质,选用镍离子亲和层析和快速蛋白液相色谱(FPLC),纯化融合蛋白。对纯化的蛋白进行酶切分析并用Western blot分析酶切效率,得到最佳酶切条件为:14μg融合蛋白加0.3 U凝血酶在20℃下消化16 h,标签被彻底切除。将纯化好的CpxR蛋白,进行圆二色谱分析,通过计算得到蛋白的二级结构为52.6%α-螺旋、8.6%β-折叠、15.6%β-转角和22.4%无规则卷曲。稳定性研究结果表明CpxR具有良好热稳定性,适于结晶学研究。微晶体筛选结果显示,在水合硫酸镁和Tris结晶剂内有类似微晶体的生成。本文对CpxR蛋白的生化性质和基本功能进行了初步研究,建立了一套完整的CpxR蛋白体外高效表达和纯化的方法,成功预测了蛋白的二级结构,并筛选出了一个微晶体生长条件,为接下来的大晶体培养和空间结构研究奠定了基础。