低雄激素状态对大鼠阴茎海绵体IKca和SKca3表达影响

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目的:探讨低睾酮状态能否通过调节依赖钙离子(Ca2+)激活的中电导率(IKca)和小电导率钾通道(SKca3)影响勃起功能。方法:将36只健康的Sprague-Dawley雄性大鼠适应性喂养1周后,采用完全随机法将大鼠分为六个组(n=6),分别为:4w对照组(4w-sham group),4w去势组(4w-cast group),4w去势后睾酮替代组(4w-cast+T group)、8w对照组(8w-sham group)、8w去势组(8w-cast group)、8w去势后睾酮替代组(8w-cast+T group)。去势组和去势后睾酮替代组大鼠均手术去势,其中睾酮替代组在去势后次日给予睾酮(30 mg/kg)隔天皮下注射,其余各组则皮下注射等量植物油。分别在4w、8w以后,检测各组大鼠的血清睾酮水平、平均动脉压(MAP)及最大阴茎海绵体内压(ICPmax)。检测完以上指标后,按实验动物伦理处死大鼠获得阴茎海绵体标本,将标本分三部分,第一部分用于免疫组化检验IKca和SKca3在大鼠阴茎组织中表达情况,在细胞水平定位分析;第二部分用于Western blot检测各组大鼠阴茎海绵体中IKca、SKca3、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、P-eNOS蛋白表达情况;第三部分用于RT-qPCR检测各组大鼠阴茎海绵体中SKca3、IKca mRNA表达情况。免疫组化实验结果采用Image Pro Plus软件测量阳性表达的积分光密度值(IOD)来表示IKca和SKca3的表达水平,Western blot结果条带采用Quanity One图像软件测量条带相对光密度值来表示IKca、SKca3、eNOS、P-eNOS蛋白表达水平,RT-q PCR用2-ΔΔCt法得出实验结果来表示SKca3、IKca mRNA相对表达量。结果:各组大鼠MAP之间无统计学差异。4w去势组血清睾酮水平(1.51±0.27nmol/L)较4w对照组(21.92±1.90 nmol/L)、4w睾酮替代组(22.18±2.72nmol/L)显著降低(p<0.01),8w去势组血清睾酮水平(0.37±0.13nmol/L)较8w对照组(21.26±2.69 nmol/L)、8w睾酮替代组(21.52±2.56nmol/L)显著降低(p<0.01),8w去势组血清睾酮水平较4w去势组显著下降(p<0.01),对照组和睾酮替代组间无显著差异。3V、5V电刺激下ICPmax/MAP在去势组(4w去势组(0.40±0.02、0.56±0.02)、8w去势组(0.27±0.02、0.42±0.01))较对照组(4w对照组(0.65±0.04、0.80±0.02)、8w对照组(0.65±0.04、0.78±0.02))和替代组(4w替代组(0.67±0.06、0.81±0.04)、8w替代组(0.67±0.05、0.81±0.01))显著降低(p<0.01),8w去势组较4w去势组显著降低(p<0.05),对照组和替代组间无显著差异。免疫染色检验提示SKca3在阴茎海绵体的海绵窦和小血管的内皮细胞胞膜上,靠近海绵窦内皮细胞层的SMC,血管壁SMC中均有较强的表达,而IKca主要在阴茎海绵体的海绵窦内皮的细胞膜上表达,且少许表达在靠近海绵窦内皮层的SMC中。SKca3、IKca mRNA相对表达水平在去势组(4w去势组(0.61±0.06、0.69±0.05)、8w去势组(0.35±0.02、0.49±0.04))较对照组(4w对照组(1.00±0、1.00±0)、8w对照组(1.04±0.15、0.97±0.07))和替代组(4w替代组(1.00±0.02、1.02±0.11)、8w替代组(0.99±0.07、1.04±0.05))显著降低(p<0.01),8w去势组较4w去势组显著降低(p<0.05),对照组和替代组间无显著差异。eNOS、P-eNOS、SKca3、IKca蛋白表达水平(目的/GAPDH)在去势组(4w去势组(0.60±0.07、0.47±0.05、0.67±0.08、0.62±0.05)、8w去势组(0.42±0.06、0.22±0.07、0.40±0.05、0.44±0.02))较对照组(4w对照组(0.82±0.04、0.82±0.01、0.92±0.03、0.90±0.03)、8w对照组(0.80±0.03、0.79±0.03、0.86±0.04、0.87±0.04))和替代组(4w替代组(0.83±0.01、0.78±0.01、0.88±0.06、0.90±0.04)、8w替代组(0.83±0.04、0.78±0.05、0.85±0.06、0.93±0.04))显著降低(p<0.01),8w去势组较4w去势组显著降低(p<0.05),对照组与替代组间无显著差异。睾酮与阴茎海绵体中SKca3、IKca表达呈正相关,且SKca3、IKca表达与P-eNOS/eNOS呈正相关。结论:低睾酮状态可能通过下调大鼠阴茎海绵体中SKca3和IKca表达,抑制eNOS的表达或活性,使ICPmax/MAP下降。
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