【摘 要】
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目的:通过分析大鼠脑缺血再灌注后相关蛋白的时相性变化及Netrin-1对血脑屏障是否具有保护作用,为临床上治疗急性缺血性卒中相关疾病提供实验室的科学依据。方法:成年SD大鼠36只,随机将大鼠分为6组,每组6只,分为假手术组和MCAO12h组、MCAO24h组、MCAO48h组、PBS组和NT-1组。参照改良Longa的方法建立右侧大脑中动脉阻断(Middle cerebral artery occ
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目的:通过分析大鼠脑缺血再灌注后相关蛋白的时相性变化及Netrin-1对血脑屏障是否具有保护作用,为临床上治疗急性缺血性卒中相关疾病提供实验室的科学依据。方法:成年SD大鼠36只,随机将大鼠分为6组,每组6只,分为假手术组和MCAO12h组、MCAO24h组、MCAO48h组、PBS组和NT-1组。参照改良Longa的方法建立右侧大脑中动脉阻断(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)的模型(阻断2h),造模后通过Zea-Longa法对动物中枢神经系统功能行为学进行评分,HE染色评估鉴定脑缺血组织模型,根据脑组织标本的损伤情况鉴定脑缺血模型,只打开颈动脉鞘不做颈动脉阻断缺血处理的为假手术组即Sham组,MCAO组为分别在缺血再灌注后12小时、24小时、48小时采集脑组织标本,PBS组与NT-1组在建立模型成功后立即注射等体积的PBS或Netrin-1溶液,24小时后立即采集脑组织标本。通过Zea-Longa法对大鼠中枢神经的功能进行行为学评分,干湿重法检测脑组织的含水量,Western blot检测脑组织标本中缺血梗死区Occludin、Claudin-5、ZO-1及Caspase-3表达的水平。免疫荧光检测脑组织标本中缺血梗死区Occludin、Albumin表达与分布。结果:脑组织样本含水量,与假手术组样本相比,MCAO12h、24h、48h均呈现递增趋势;NT-1组较MCAO24h组下降。神经行为学评分,与MCAO24h组相比,NT-1组较下降。与假手术组样本相比,MCAO24h组Occludin、Claudin-5和ZO-1蛋白表达显著下降,Caspase-3蛋白表达显著上升,建模成功后随时间变化Occludin、Claudin-5和ZO-1蛋白表达均开始下降,48h达到最低值,Caspase-3开始上升,48h达到最高值;NT-1样本组与假手术组比较,Occludin、Claudin-5和ZO-1蛋白表达有所下降,但与MCAO24h组相比,下降程度不及MCAO24h明显,同样NT-1样本组的Caspase-3蛋白表达较假手术组有所上升但与MCAO24h组相比,上升程度不及MCAO24h明显。在免疫荧光方面,与假手术组相比,MCAO组Occludin明显下降,Albumin明显上升,NT-1组较假手术组下降及上升数量少于MCAO组。结论:脑缺血再灌注损伤后Occludin、Claudin-5和ZO-1呈下降趋势,Caspase-3明显上升;Netrin-1对脑缺血再灌注损伤血脑屏障通透性具有保护作用。
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