背景与目的:随着当前社会老年化的加速,外周动脉疾病造成的危害愈发严重,目前全球范围内约有2亿患者。然而,其发生发展的机制仍未被完全阐明,治疗手段也相对有限。内皮功能及血管新生对外周动脉疾病的恢复至关重要。内皮细胞在保护血管以及调控血管新生中起到重要的作用。能量稳态相关基因（energy homeostasis associated gene,ENHO）可以调节能量代谢并具有一定的内皮保护功能。本文意在探讨内皮细胞的ENHO在下肢缺血中对血管新生的调节作用及其分子机制。方法:利用ENHO基因内皮特异性敲除(ENHOΔEC)小鼠以及同窝对照(ENHOWT)小鼠,在他莫昔芬诱导激活1周后,结扎小鼠单侧股动脉并离断结扎点构建下肢缺血模型。分别于术后0、3、7、14、28天行激光多普勒超声检测小鼠下肢血流情况,术后3、14、28天取腓肠肌,进行免疫荧光检测微血管密度。体外培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）,并使用慢病毒敲低ENHO基因,将细胞置于1%O2的缺氧环境中培养,建立体外缺氧模型,通过血管形成实验、Transwell迁移实验、划痕实验和Ed U增殖实验,观察ENHO基因及其潜在受体G蛋白偶联受体19蛋白（G protein coupled recepror,GPR19）对HUVEC增殖、迁移以及成血管功能的影响,Western blot检测血管新生相关蛋白的表达。在敲低ENHO基因的HUVEC上用si RNA敲低以及质粒过表达GPR19,进行Transwell迁移实验、划痕实验和Ed U增殖实验,观察GPR19蛋白对ENHO功能的影响。。结果:ENHOΔEC小鼠的血管内皮和慢病毒转染的HUVEC中ENHO基因的表达显著下调,提示ENHO基因特异性敲除小鼠以及HUVEC稳转株构建成功。进一步研究显示,内皮中ENHO敲除抑制缺血后血管新生。在血流恢复速度、血管新生指标血小板-内皮细胞粘附分子1（Platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31）的免疫荧光检测中,ENHOΔEC小鼠均显著低于对照小鼠。在细胞实验上,缺氧下的内皮细胞的CD31表达增高,而ENHO的缺失明显抑制了CD31的升高。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）,磷酸化AMP依赖的蛋白激酶（Adenosine 5‘-monophosphate（AMP）-activated protein kinase,P-AMPK）的表达结果与CD31类似。同时,HUVEC小管形成实验、Transwell迁移实验、划痕实验、Ed U增殖实验的结果表明缺氧促进内皮细胞的增殖、迁移、成血管功能,ENHO以及GPR19的缺失明显抑制上述变化。此外,对GPR19的抑制可以进一步加剧ENHO敲低对HUVEC的功能抑制。反之,对GPR19的过表达则可以部分解除ENHO敲低带来的影响。结论:本实验证实了内皮细胞中的ENHO基因对于下肢缺血后的血供的恢复具有重要的作用。在内皮细胞中ENHO基因通过激活GPR19调控内皮细胞增殖、迁移、成血管等功能。并且,这可能与AMPK通路的激活有关。这为深入了解血管新生的过程及其机制提供了一定的理论基础,为下肢缺血的治疗提供了新的方向。