【摘 要】
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第一部分慢性阻塞性肺疾病患者自噬对组蛋白去乙酰化酶-2的影响目的:观察COPD患者外周血单个核细胞（PBMCs）的自噬情况,以及自噬对组蛋白去乙酰化酶-2（Histone Deacetylase 2,HDAC2）的影响。方法:选取非吸烟健康志愿者（HVs）、吸烟志愿者（SVs）、稳定期的慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者各8例,每个研究对象抽取外周静脉血15ml,采用泛影钠-不连续密度梯度离心法,在
【基金项目】
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项目名称:中性粒细胞胞外陷进（NETs）通过上调单核细胞 PI3K-δ/Akt通路活性增加烟草烟雾暴露诱发的糖皮质激素抵抗?,项目合同编号:03101218021D,项目来源:国家自然科学基金,项目起止时间:2019.01.01-2022.12.31
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第一部分慢性阻塞性肺疾病患者自噬对组蛋白去乙酰化酶-2的影响目的:观察COPD患者外周血单个核细胞（PBMCs）的自噬情况,以及自噬对组蛋白去乙酰化酶-2（Histone Deacetylase 2,HDAC2）的影响。方法:选取非吸烟健康志愿者（HVs）、吸烟志愿者（SVs）、稳定期的慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者各8例,每个研究对象抽取外周静脉血15ml,采用泛影钠-不连续密度梯度离心法,在无菌条件下分离出外周血单个核细胞在体外培养。1、观察COPD患者的自噬情况。将细胞分成三组:（1）HVs组（2）SVs组（3）COPD组,WB法测定各组细胞的自噬相关蛋白LC3B、ATG5表达水平。2、观察自噬抑制剂3-MA对COPD患者外周血单个核细胞炎症介质IL-8、TNF-α的影响。将细胞分成四组:（1）HVs组（2）SVs组（3）COPD组（4）COPD+3-MA组,ELISA法检测各组细胞IL-8、TNF-α的浓度。3、观察自噬对COPD患者外周血单个核细胞HDAC2蛋白表达水平的影响。将细胞分成四组:（1）HVs组（2）SVs组（3）COPD组（4）COPD+3-MA组,WB法测定各组细胞HDAC2蛋白表达水平。结果:1、非吸烟健康者与吸烟者的外周血单个核细胞（PBMCs）中自噬相关蛋白LC3B、ATG5的表达水平相比较,无明显差异（P>0.05）,而COPD患者较非吸烟组、吸烟组中自噬相关蛋白LC3B、ATG5表达水平显著增加（P<0.05）。2、自噬抑制剂3-MA可显著抑制COPD患者外周血单个核细胞炎症因子IL-8、TNF-α的分泌水平（P<0.05）。3、COPD患者外周血单个核细胞（PBMCs）的HDAC2蛋白表达水平较非吸烟健康者与吸烟者明显降低,予自噬抑制剂3-MA预处理后,COPD患者PBMCs的HDAC2蛋白表达增高（P0.05）,但在终浓度为0.5%的CSE中孵育,细胞活性、生长状况明显受抑制（P0.05）。2、在CSE的刺激下,BEAS-2B细胞发生的自噬明显增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。3、3-MA抑制自噬表达后,BEAS-2B细胞在CSE刺激下炎症因子IL-8、TNF-α表达降低（P<0.05）;Si RNA干扰LC3B表达后,炎症因子IL-8表达降低,而其抑制率增加,差异均具有统计学意义（P<0.05）。4、通过Si RNA LC3B转染技术降低LC3B的表达后,HDAC2蛋白表达明显增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1、CSE刺激下的BEAS-2B细胞自噬明显增加且炎症反应增强。2、通过自噬抑制剂3-MA预处理或Si RNA干扰自噬相关蛋白LC3B,即自噬表达降低后,炎症反应减轻以及地塞米松干预后的IL-8抑制率增加,炎症调控基因HDAC2蛋白表达上调。
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