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目的:探讨中性粒细胞胞外捕获网(neutrophil extracelluar traps,NETs)对膀胱癌T24细胞迁移、侵袭的影响及NETs对外周血单个核细胞(PBMCs)增殖、细胞因子表达的影响;探讨NETs对小鼠膀胱肿瘤生长及膀胱肿瘤中CD3表达的影响。方法:将卡介苗(BCG)与中性粒细胞共同培养4小时诱导NETs形成,制备NETs悬液;取不同浓度NETs与膀胱癌T24细胞共同培养,通过划痕实验、Transwell实验方法,分析NETs对膀胱癌T24细胞迁移、侵袭的影响;取不同浓度NETs与PBMCs共同培养,通过CCK-8、流式细胞术及ELISA法,分析NETs对PBMCs增殖、PBMCs细胞表面CD4、CD8的表达和PBMCs分泌Th1型细胞因子TNF-α及IFN-γ的水平。建立Balb/c小鼠皮下膀胱肿瘤模型,将BCG诱导形成的NETs悬液皮下注射,同时设立阴性对照组,观察小鼠的一般状况和肿瘤生长情况;摘取肿瘤,对肿瘤组织标本行HE染色,观察肿瘤病理情况;进行CD3免疫组织化学染色,检测膀胱肿瘤中免疫细胞的分布情况。结果:1.划痕实验和Transwell迁移实验结果显示:不同浓度NETs与膀胱癌T24细胞共同培养后,实验组(1×NETs组和2×NETs组)与对照组相比,膀胱癌T24细胞迁移能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。2.Transwell侵袭实验结果显示:不同浓度NETs与膀胱癌T24细胞共同培养后,实验组(1×NETs组和2×NETs组)与对照组相比,膀胱癌T24细胞侵袭穿过小室的细胞数量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。3.不同浓度的NETs作用于PBMCs细胞后,NETs能够明显促进PBMCs细胞增殖,随着NETs浓度增加,PBMCs细胞增殖作用逐渐减弱。4.流式细胞术结果显示:实验组(0.5×NETs组及2×NETs组)PBMCs细胞CD4表达量与对照组相比明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),0.5×NETs组与2×NETs组相比无明显差异;PBMCs细胞CD8表达量各组之间均无明显差异。5.不同浓度NETs与PBMCs共同培养后,PBMCs细胞在不同时间点(24h、48h、72h)分泌TNF-α及IFN-γ的水平与对照组相比明显增加,随着NETs浓度增加,PBMCs细胞分泌TNF-α及IFN-γ的水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。6.在小鼠皮下注射NETs悬液14天后,摘除肿瘤,NETs组小鼠皮下肿瘤体积和肿瘤重量均明显小于阴性对照组;另外,HE染色病理结果显示均为恶性肿瘤细胞;7.免疫组化检测结果显示:NETs组肿瘤组织中CD3细胞阳性数较阴性对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:1.BCG诱导形成的NETs在体外能够抑制膀胱癌细胞迁移和侵袭作用。2.NETs可以促进PBMCs细胞的增殖作用,并能促进PBMCs细胞表面CD4的表达和Th1型细胞因子表达的上调,从而通过发挥免疫调节作用,促进NETs的抗肿瘤作用。3.在小鼠皮下膀胱肿瘤模型中,NETs能够抑制肿瘤生长,并能够活化肿瘤组织中淋巴细胞,发挥免疫活化作用。