宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤，发病率仅次于乳腺癌居第二位，死亡率为妇科肿瘤之首，严重威胁广大妇女的生命和健康。近年来我国宫颈癌的发病率明显上升，且发病年龄逐渐年轻化。宫颈癌的主要特点是局部蔓延，早期的侵袭转移往往使患者错过了最佳的手术时机。因此，寻找一种抗宫颈癌侵袭转移的药物将会成为成功治疗宫颈癌的关键。 中医学把宫颈癌多归属“癥瘕”范畴，病位在胞宫，我们认为病机上瘀血内停是关键，故提出活血化瘀，缓消癥块的治疗大法，选用《金匮要略》经典方剂桂枝茯苓丸(桂枝、茯苓、丹皮、桃仁、芍药)为治病方剂。关于桂枝茯苓汤的应用研究在我国已有悠久的历史，常用于症结肿块的治疗，在治疗恶性肿瘤方面可能发挥着更重大的作用。近几年，白藜芦醇作为一种天然植物抗毒素，在防治肿瘤方面也显示出巨大潜力。研究表明，白藜芦醇具有抗炎、抗氧化、抗动脉粥样硬化、雌激素样、免疫调节等多种生物学功能。但两者的抗肿瘤作用的机理均尚未明析，尤其对抗宫颈肿瘤侵袭和转移机制的研究更属空白。 研究目的： 本实验从基因水平、蛋白水平以及细胞形态学等方面观察桂枝茯苓汤、白藜芦醇、桂枝茯苓汤合白藜芦醇对体外培养的宫颈癌HeLa细胞生长抑制情况、侵袭能力情况、基因蛋白及酶表达活性情况，从而探讨桂枝茯苓汤、白藜芦醇抑制宫颈癌细胞侵袭转移的分子机制，摸索其合理的用药浓度，并观察桂枝茯苓汤与白藜芦醇联合用药后宫颈癌细胞侵袭转移能力的改变情况，将用药物的浓度和治疗效果达到最佳，起到“减毒增效”作用，为宫颈癌侵袭转移的药物治疗提供新的策略。 材料与方法： 1.应用不同浓度的桂枝茯苓汤、白藜芦醇、桂枝茯苓汤合白藜芦醇分别作用于宫颈癌HeLa细胞，采用MTT法检测细胞的生长抑制情况，计算出药物的半量抑制浓度(IC50)。根据细胞生长的抑制情况联合药物的IC50值，我们将对细胞增殖影响较小的药物浓度作为后续检测药物对宫颈癌细胞侵袭转移影响的实验药物浓度。 2.经桂枝茯苓汤、白藜芦醇、桂枝茯苓汤合白藜芦醇分别处理HeLa细胞24h后，Transwell侵袭实验检测宫颈癌细胞侵袭能力的改变情况，RT-PCR、Westernblot及酶谱法分别检测与肿瘤细胞侵袭转移密切相关的MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2mRNA、蛋白及酶表达活性的改变情况，计算MMP-2/TIMP-1、MMP-9/TIMP-2值，探讨基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶组织抑制剂及两者之间的平衡关系与宫颈癌侵袭转移之间的关系。 结果： 1.桂枝茯苓汤、白藜芦醇对宫颈癌HeLa细胞体外生长具有明显的抑制作用，在任一浓度的桂枝茯苓汤和白藜芦醇合用后抑制率均明显高于单独用药组，并且分别随着两药浓度的增加而增加。 2.桂枝茯苓汤、白藜芦醇单药组在对细胞增殖影响较小的情况下时，能够在基因、蛋白及酶表达活性水平上明显抑制与肿瘤细胞侵袭转移相关的基质金属蛋白酶及其组织抑制剂的表达，明显降低MMP-2/TIMP-1、MMP-9/TIMP-2值，恢复基质金属蛋白酶及其组织抑制剂之间的平衡状态，降低基质金属蛋白酶对细胞外基质的降解能力，从而有效的抑制宫颈癌细胞的侵袭转移。 3.低浓度的25mg/L桂枝茯苓汤和0.25mmol/L白藜芦醇联合应用，与100mg/L桂枝茯苓汤或1mmol/L白藜芦醇比较，对宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移产生明显的抑制作用一致。 结论： 桂枝茯苓汤、白藜芦醇能够对宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移产生明显的抑制作用。它们联合应用后既能增强对宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移的抑制作用，又能减少用药浓度，从而起到“减毒增效”作用。