【摘 要】
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[目的] 以兔肌源性干细胞(muscle—derived stem cell,MDSC)为种子细构建组织工程化阴茎海绵体,并研究其体内植入后的生长情况。 [方法] 1.肌源性干细胞的取材:利用Ⅺ
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[目的]
以兔肌源性干细胞(muscle—derived stem cell,MDSC)为种子细构建组织工程化阴茎海绵体,并研究其体内植入后的生长情况。
[方法]
1.肌源性干细胞的取材:利用Ⅺ型胶原酶和中性蛋白酶结合消化法和差速贴壁法分离培养新西兰兔MDSC,并对MDSC生物学特性进行初步探讨。
2.脱细胞阴茎海绵体基质的构建:将兔阴茎海绵体采用Triton—X100和氨水混合液进行约16天的低温振荡脱细胞处理,制备脱细胞阴茎海绵体基质。
3.组织工程化阴茎海绵体的构建:调整MDSC为30×106/ml,将其种植于脱细胞阴茎海绵体基质上,体外连续培养5天,构建组织工程化阴茎海绵体。
4.组织工程化阴茎海绵体体内植入实验:无菌条件下,纵行切开兔阴茎右侧白膜,将所构建的组织工程化的阴茎海绵体嵌入裂口,两侧与白膜吻合。术后2,4,6月时分别取材,对移植的海绵体组织进行α—SMA和eNOS兔疫组化观察。设单纯阴茎海绵体脱细胞基质移植物为对照组。
[结果]
1.分离的细胞呈椭圆形或梭形,增殖较快,免疫荧光和细胞免疫化学结果证实desmin和Bcl—2阳性,CD45阴性,初步定性为MDSC。
2.制备的脱细胞阴茎海绵体呈乳白色,质稍软,切片中未见细胞结构存在,扫描电镜下胶原支架略松散,之间形成窦腔样结构。
3.所构建的组织工程化阴茎海绵体富含MDSC,扫描电镜下可观察到细胞分布在基质表面,培养5天后的组织切片可观察到种子细胞在海绵体结构内生长。
4.术后2,4,和6个月的组织切片显示实验组细胞数量多于对照组,细胞排列较对照组整齐,α—SMA阳性细胞数量与eNOS阳性细胞数量多于对照组。
[结论]
以MDSC为种子细胞,以脱细胞阴茎海绵体基质为支架构建的组织工程化阴茎海绵体在体内的生长分化效果优于对照组,MDSC可分化为平滑肌细胞和内皮细胞,为阴茎重建的实验研究打下初步基础。
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