猪流行性腹泻病毒(PEDV)是猪流行性腹泻(PED)的致病因子,对养猪业危害巨大。自2010年12月以来,中国各地猪群中暴发大规模的腹泻疾病,其特征是水性腹泻、呕吐、脱水和乳猪高死亡率。研究表明,该疫病是由强毒力的基因2b亚型(G2b亚型)PEDV变异株引起,该型毒株与经典疫苗株之间存在较大的抗原性差异,导致免疫保护效果不理想,因此迫切需要研制相应的疫苗用于该疫病的防控。本研究从江苏某规模化猪场急性腹泻的哺乳仔猪小肠样品中分离到1株PEDV(命名为JSX2014株),该毒株通过细胞传代适应之后可在Vero细胞上稳定增殖并产生细胞病变(CPE)。采用RT-PCR方法对JSX2014株的全基因进行扩增并测序,运用MEGA5.05软件分析比较JSX2014株与其他PEDV毒株的全基因序列及S基因序列遗传进化关系,表明JSX2014毒株属于当前流行的G2b亚型。本研究检测了 G2b亚型PEDV JSX2014毒株在Vero细胞上以不同接毒量及接毒后不同时间点的病毒滴度,以确定该毒株的细胞适应毒株增殖规律。针对PEDV的N基因设计特异性引物,建立实时荧光定量方法,对增殖的JSX2014毒株进行定量。根据《中国兽药典》和《中华人民共和国兽用生物制品质量标准》要求建立了 JSX2014毒株的种子库,经RT-PCR检测未见外源病毒污染。利用Vero细胞转瓶培养工艺增殖JSX2014毒株抗原,浓缩后经甲醛灭活,添加氢氧化铝佐剂,制备了灭活疫苗。用该灭活疫苗免疫产前母猪及50日龄断奶仔猪,利用间接ELISA方法和血清中和试验分别检测疫苗免疫后的抗体消长规律。间接ELISA试验显示,断奶仔猪于免疫后14d已开始产生特异性抗体,免疫后42d表现100%血清抗体转阳。以JSX2014作为指示病毒进行中和实验,显示接种灭活JSX2014疫苗的断奶仔猪于免疫后42天表现最高血清抗体水平,与间接ELISA检测抗体增长规律相一致。免疫母猪分娩后7天的血清、初乳样品的中和抗体效价明显高于G1a型CV777毒株制备的灭活疫苗免疫组。综合所有实验结果本实验制备的JSX2014株灭活疫苗对PEDV G2b型毒株可以提供高效免疫保护。