血脂紊乱、高血压、高胰岛素血症、肥胖特别是中心性肥胖、葡萄糖耐量异常等心血管危险因素经常在个体中聚集，被称为胰岛素抵抗综合征，胰岛素抵抗被认为是上述危险因素聚集的共同病理生理基础。但是，传统的检测外周循环中胰岛素的放射免疫方法是建立在多克隆抗体的基础上，特异性较差，与血清的胰岛素原有交叉反应，被称为免疫反应性胰岛素。部分研究表明，外周循环中胰岛素原水平与心血管危险因素的关联比真胰岛素强。因此，以真胰岛素为基础数值的胰岛素抵抗指数、胰岛素原水平与心血管危险因素的关系值得进一步研究。 第一部分：单克隆抗体酶联免疫方法检测真胰岛素、胰岛素原方法的建立 本研究分别采用双单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验方法来检测外周循环中的真胰岛素、胰岛素原的含量，在方法学中引入了生物素-亲和素放大系统，该方法具有较高的灵敏性与较好的特异性。 1、单克隆抗体酶联免疫方法检测真胰岛素方法的建立 该方法是建立在酶免疫分析方法的基础上的，采用了两种与胰岛素特异结合的小鼠的单克隆抗体。其中，一种抗体(HUI-018)能够结合在胰岛素分子的一侧的某一位点，被包被在酶标板上；另一种抗体(OXI-005)，能够结合在胰岛素分子的另一侧的某一位点上，被与生物素结合。生物素化的抗体、标本或标准被加入到已包被好的酶 南京匹村人学博卜学付论义标板上，然后室温孵育，在孵育过程中，包被抗体、胰岛素与生物素化的抗体在酶标板反应孔的塑料表面组成复合物，该复合物不被孵育之后的冲洗程序所冲洗掉。冲洗后加入亲和素标记的辣根过氧化物酶，与生物素标记的抗体的生物素进行结合。当加入过氧化物与TMB后，由于酶的催化作用转变为可溶性的颜色产物，且颜邑的深4戈与标本或标准中的胰岛素的含量呈正比，在一定反应时间内加入磷酸终止反应，颜色稳定，使用酶标仪读取吸光度值，根据标准曲线，求出标本中胰岛素的含量。该方法 白灵敏度为0．6306 miu／L与 142 Pmol／L白胰岛素原、3960 pmol／L的C肽无交叉反应；平均回收率为97．12％，批内与批间变异系数分别为门石5％与5．％％；线性标准范围为O．63～10Otilll／L。 Z、单克隆抗体酶联免疫方法检测胰岛素原方法的建立 该方法是建立在酶免疫分析方法的基础上。采用了两种小鼠单克隆抗体进行检测，其中，一种抗体冲巳卜00能够与人C肽特异结合，被包被在酶标板反应孔上；另一种抗体（HUI00），能够与人胰岛素分子特异结合被生物素标记后作为检测抗体。在分析过程中，血清或血桨被1：二稀释以消除血清或血浆效应。在第一步反应中，当标本被加入到已包被好的反应孔中后，标本中的胰岛素原将与包被抗体结合；在第二步反应中，被结合的胰岛素原与能够与人胰岛素分子特异结合的并且被生物素化的检测抗体结合Z 第三步反应，当加入能够与标记生物素结合的辣根过氧化物酶标记的链球菌亲和素后，在包被抗体一胰岛素原一检测抗体复合物中的被结合的 4 肉方IN：村人学博D：学位论义检测抗体的含量可以检测到Z 最后，当辣根过氧化物酶的底物（四甲基联苯胺／双氧水溶液系统）被加入到反应孔中后，由于酶促反应产生的颜色而且颜色的深浅与辣根过氧化物酶（胰岛素原）的含量成比例；在一定反应时间内加A磷酸终止反应，颜色稳定，使用酶标仪读驭吸光度值，根据标准曲线，求出标本中胰岛素原的含量。该检测方法的灵敏度为 0．83 pmol几，与 1200 pmol／L6胰岛素、3960pl。OI／L自 C月无交叉反应，平均回收率为 96．47％，匕内变异系数小于 11．4％，批间变异系数小于 11二％，线性标准范围为 0．83叫 42plllol／L。 第二部分：胰岛素抵抗与。。血管危险因素聚集的流行病学研究 按照随机抽样的原贝IJ，在江苏省 IF ）I、l市农村调查了H 96名 3 5巧9岁的成年人，其中男性533名，女性663名，平均年龄为46．69岁，应用灵敏性高、特异性强的以单克隆抗体技术为基础的ELISA方法检测调查对象的真胰岛素、胰岛素原，采用＊＊＊A指数作为评价胰岛素抵抗的指标，按照个体所具有的。。血管危险固素的数目建立危险固素评分，以共个危险囚素定义为危险因素聚集。单因素及多因素统计分析方法被用来研究＊＊＊A指数、胰岛素原水平与。。血管危险固素聚集的关系。 l、HOMA指数在人群中的分布 HOMA指数在本研究人群中的中位数（四分位问距）为0．97 ＊．S入1．凹人 在性别间的分布有统计学差异，为女性高于男性沪叩．OI）。方差分析结果显示，NOMA指数在年龄组间的分布无统 5