mir-372靶向LATS2影响乳腺癌细胞生物学行为

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiyufeike
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:  本课题对miR-372在乳腺癌组织和癌旁相应正常组织中的表达进行检测,分析其临床意义。同时通过细胞实验以及动物实验研究miR-372对乳腺癌发生、发展以及具体细胞生物学行为的影响,并对其中的相关机制进行探讨,旨在明确miR-372在乳腺癌恶性化进程中的具体作用机理,为寻找新的乳腺癌治疗分子标志物和药物作用靶点奠定基础。  方法:  (1)采集24例2014年7月-2016年7月北海市人民医院收治的乳腺癌患者癌组织和癌旁正常组织。荧光定量PCR检测组织中miR-372表达。分析miR-372表达与乳腺癌患者临床病理特征的相关性。  (2)荧光定量PCR检测人正常乳腺细胞系MCF-10A以及人乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3、BT-474、MDA-MB-231中miR-372表达。将MDA-MB-231细胞随机分为scramble组:将scramble转染细胞;AS-miR-372组:将AS-miR-372转染细胞。荧光定量PCR检测上述细胞中miR-372表达。MTT法检测各组细胞的增殖活性,细胞集落形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。生物信息学软件预测miR-372靶基因,荧光素酶报告系统进行验证。荧光定量PCR和western blot检测miR-372表达抑制后LATS2mRNA和LATS2蛋白表达进一步验证。将MDA-MB-231细胞随机分为scramble组:将scramble转染细胞;AS-miR-372组:将AS-miR-372转染细胞;AS-miR-372+si-LATS2组:将AS-miR-372和si-LATS2共转染细胞。western blot检测各组细胞中LATS2蛋白表达,细胞集落形成实验检测细胞克隆形成能力,MTT法检测细胞增殖活性。  (3)将MDA-MB-231细胞随机分为scramble组:将scramble转染细胞;AS-miR-372组:将AS-miR-372转染细胞。荧光定量PCR检测细胞中miR-372表达。将两组细胞分别接种裸鼠右肩甲皮下,建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型,观察裸鼠成瘤情况,计算移植瘤体积及重量。  结果:  (1)乳腺癌组织中miR-372表达水平显著高于正常乳腺组织(P<0.05)。miR-372的表达水平与乳腺癌患者TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者的年龄、绝经、病理类型、肿瘤大小、c-erbB-2表达、PCNA表达、PR表达及ER表达无关(P>0.05)。  (2)与MCF-10A组相比,MCF-7、SK-BR-3、BT-474、MDA-MB-231中miR-372的表达水平均显著升高(P<0.05)。在MDA-MB-231细胞中,与scramble组相比,AS-miR-372组细胞中miR-372的表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与scramble组相比:AS-miR-372组细胞增殖活性降低,细胞克隆形成数量明显减少,G1期和M期细胞的数量明显增多,S期细胞数量显著减少,细胞凋亡率明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。LATS2被预测为miR-372的一个靶基因,miR-372在LATS2上所绑定的位置位于其3UTR区域。在MDA-MB-231细胞中,当miR-372表达水平下调时,转染野生型LATS2-WT表达载体的细胞中荧光素酶的含量明显增高(P<0.05),而转染突变型LATS2-MUT表达载体的细胞中荧光素酶的表达水平无明显变化(P>0.05)。当抑制miR-372表达,细胞中LAST2mRNA和蛋白的表达水平均显著增高(P<0.05)。与scramble组相比,AS-miR-372组中LATS2蛋白的表达水平明显增高(P<0.05),而AS-miR-372+si-LATS2组细胞中LATS2蛋白的表达水平则显著降低(P<0.05);与scramble组相比,AS-miR-372组细胞的克隆形成数量明显减少(P<0.05),而AS-miR-372+si-LATS2组细胞的克隆形成数量则无差别(P>0.05);与scramble组相比,AS-miR-372组细胞在24、48、72h时的增殖活性均降低(P<0.05);而AS-miR-372+si-LATS2组细胞各时间点的增殖活性则无差别(P>0.05)。  (3)与scramble组相比,AS-miR-372组细胞中miR-372的表达水平明显降低(P<0.05),AS-miR-372组的裸鼠移植瘤体积及重量均明显减小(P<0.05)。  结论:  (1)miR-372表达水平在乳腺癌细胞系和原发性乳腺癌肿瘤组织中均显著升高。  (2)miR-372表达降低能够抑制乳腺癌细胞增殖、生长,产生G1/M期阻滞,促进细胞凋亡,其机制与miR-372能够下调LATS2的表达有关。  (3)miR-372能够促进裸鼠乳腺癌细胞移植瘤的生长。
其他文献
【中图分类号】G633.6  数学源于现实,用于现实。把所学的知识应用到生活中去,是学习数学的最终目的。正如《数学课程标准》中指出:教师应该充分利用学生已有的生活经验,引导学生把所学的数学知识应用到现实中去,以体会数学在现实生活中的应用价值。教师应根据学生的认知规律,从他们的生活实际出发,在数学与生活之间架起桥梁。数学知识生活化是现代数学教学的改革方向。下面就谈谈数学知识生活化的几点看法。  一、
期刊
内容提要:由于职业的关系,课后饭余,常常就教育问题陷入思虑。课堂教学模式、作业、考试、赞赏式教育都放映了中国应试教育的根深蒂固,让人忧虑不堪。希望以这些不连贯的弱音呼唤真正的素质教育,呼唤有中国特色的素质教育。  关键词:初中教育;教学模式;作业;考试;赞赏式教育;思虑  【中图分类号】G630  正文:  天下兴亡,匹夫有责,教育兴衰,我心系之。由于职业的关系,课后饭余,常常就教育问题陷入思虑。
【摘要】  《语文课程标准》中指出:在教学中应注意汉字蕴涵的文化信息。借助汉字的形义的关系进行教学,通过溯源图、抽象图、古代汉字、正楷字这一演变规律进行字理教学,可以使抽象的汉字变得形象、生动,有利于提高学生的学习兴趣、增强记忆和发展思维。在识字教学中,充分渗透"理"字,采用多种字理识字教学法学习汉字,能促进学生认知、知觉、思维等方面的发展。  关键字:识字教学;汉字;字理  【中图分类号】G62
[摘要]:教材的价值在于创造性地使用过程中呈现的,教材应是一种课程资源,是师生进行对话的文本。教师要正确地认识教材,树立"教材是引子"的教材观,结合学生学习和发展的实际,对教材进行优化和有效的处理,充分发挥教材的作用,实现教学有效性。  [关键词]:新课改;教材观;优化处理  【中图分类号】G634  新课程改革的核心环节是课程实施,而课程实施的基本途径是教学,教学的依据当然是教材了。新课程改革在
内容提要:童声合唱是一种高雅的音乐艺术表演形式,是对孩子们进行审美教育的一种极为重要而富有成效的手段,是培养孩子喜欢音乐,激发他们的乐观精神,调整和谐融洽的合作情谊,保持拥有纯真、向上的良好歌唱状态。  关键词:童声合唱;训练;教学  【中图分类号】G623.71  音乐是积聚灵感、催发情感、启动想象的艺术,它作为素质教育的重要内容和实施美育的主要途径,不仅能陶冶情操、提高素养,而且有助于开发智力
【摘要】阅读教学是中学英语教学的重要组成部分,培养和提高学生的阅读理解能力是中学英语阅读教学的主要目的和任务之一。初中生的外语阅读在学生外语学习中起着至关重要的作用。教师应加强学生阅读理解能力的培养。  关键词:阅读教学;能力;技巧;合作学习  【中图分类号】G623.31  阅读是一种技能、学生通过阅读来了解世界。外语阅读学习在学生的外语学习中起着至关重要的作用。教师应有计划地进行学生阅读理解能