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目的: 本课题对miR-372在乳腺癌组织和癌旁相应正常组织中的表达进行检测,分析其临床意义。同时通过细胞实验以及动物实验研究miR-372对乳腺癌发生、发展以及具体细胞生物学行为的影响,并对其中的相关机制进行探讨,旨在明确miR-372在乳腺癌恶性化进程中的具体作用机理,为寻找新的乳腺癌治疗分子标志物和药物作用靶点奠定基础。 方法: (1)采集24例2014年7月-2016年7月北海市人民医院收治的乳腺癌患者癌组织和癌旁正常组织。荧光定量PCR检测组织中miR-372表达。分析miR-372表达与乳腺癌患者临床病理特征的相关性。 (2)荧光定量PCR检测人正常乳腺细胞系MCF-10A以及人乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3、BT-474、MDA-MB-231中miR-372表达。将MDA-MB-231细胞随机分为scramble组:将scramble转染细胞;AS-miR-372组:将AS-miR-372转染细胞。荧光定量PCR检测上述细胞中miR-372表达。MTT法检测各组细胞的增殖活性,细胞集落形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。生物信息学软件预测miR-372靶基因,荧光素酶报告系统进行验证。荧光定量PCR和western blot检测miR-372表达抑制后LATS2mRNA和LATS2蛋白表达进一步验证。将MDA-MB-231细胞随机分为scramble组:将scramble转染细胞;AS-miR-372组:将AS-miR-372转染细胞;AS-miR-372+si-LATS2组:将AS-miR-372和si-LATS2共转染细胞。western blot检测各组细胞中LATS2蛋白表达,细胞集落形成实验检测细胞克隆形成能力,MTT法检测细胞增殖活性。 (3)将MDA-MB-231细胞随机分为scramble组:将scramble转染细胞;AS-miR-372组:将AS-miR-372转染细胞。荧光定量PCR检测细胞中miR-372表达。将两组细胞分别接种裸鼠右肩甲皮下,建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型,观察裸鼠成瘤情况,计算移植瘤体积及重量。 结果: (1)乳腺癌组织中miR-372表达水平显著高于正常乳腺组织(P<0.05)。miR-372的表达水平与乳腺癌患者TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者的年龄、绝经、病理类型、肿瘤大小、c-erbB-2表达、PCNA表达、PR表达及ER表达无关(P>0.05)。 (2)与MCF-10A组相比,MCF-7、SK-BR-3、BT-474、MDA-MB-231中miR-372的表达水平均显著升高(P<0.05)。在MDA-MB-231细胞中,与scramble组相比,AS-miR-372组细胞中miR-372的表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与scramble组相比:AS-miR-372组细胞增殖活性降低,细胞克隆形成数量明显减少,G1期和M期细胞的数量明显增多,S期细胞数量显著减少,细胞凋亡率明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。LATS2被预测为miR-372的一个靶基因,miR-372在LATS2上所绑定的位置位于其3UTR区域。在MDA-MB-231细胞中,当miR-372表达水平下调时,转染野生型LATS2-WT表达载体的细胞中荧光素酶的含量明显增高(P<0.05),而转染突变型LATS2-MUT表达载体的细胞中荧光素酶的表达水平无明显变化(P>0.05)。当抑制miR-372表达,细胞中LAST2mRNA和蛋白的表达水平均显著增高(P<0.05)。与scramble组相比,AS-miR-372组中LATS2蛋白的表达水平明显增高(P<0.05),而AS-miR-372+si-LATS2组细胞中LATS2蛋白的表达水平则显著降低(P<0.05);与scramble组相比,AS-miR-372组细胞的克隆形成数量明显减少(P<0.05),而AS-miR-372+si-LATS2组细胞的克隆形成数量则无差别(P>0.05);与scramble组相比,AS-miR-372组细胞在24、48、72h时的增殖活性均降低(P<0.05);而AS-miR-372+si-LATS2组细胞各时间点的增殖活性则无差别(P>0.05)。 (3)与scramble组相比,AS-miR-372组细胞中miR-372的表达水平明显降低(P<0.05),AS-miR-372组的裸鼠移植瘤体积及重量均明显减小(P<0.05)。 结论: (1)miR-372表达水平在乳腺癌细胞系和原发性乳腺癌肿瘤组织中均显著升高。 (2)miR-372表达降低能够抑制乳腺癌细胞增殖、生长,产生G1/M期阻滞,促进细胞凋亡,其机制与miR-372能够下调LATS2的表达有关。 (3)miR-372能够促进裸鼠乳腺癌细胞移植瘤的生长。