核酸是重要的生命大分子,核酸的分析在生命科学研究中具有重要的意义。核酸特殊序列及单核苷酸多态性(SNP)的检测,在临床诊断、病理分析等方面都有很重要的作用。汞污染是一个世界性问题,对人类健康造成重要影响。滚环扩增(RCA)是新近发展起来的一种恒温核酸扩增方法。该方法具有简单、快速、高灵敏度和特异性好的特点,对核酸及单核苷酸多态性(SNP)检测具有广泛的应用前景。本论文主要应用滚环扩增技术,结合分子荧光检测开发了检测SNP和汞的新方法。1、结合灵敏度高、特异性强的滚环扩增技术和荧光共振能量转移技术,建立了一种均相检测SNP的新方法。设计挂锁式DNA探针,其3’,5’端与突变型DNA完全匹配。以突变型DNA为模板使挂锁式DNA探针特异性连接成环,然后以突变型DNA作引物进行RCA反应。同时,在RCA反应过程中,加入荧光标记的dGTP,使其结合到新合成的DNA链上,利用阳离子共轭聚合物(CCP)与DNA之间强烈的静电作用,在CCP和结合到DNA链上的荧光分子之间发生有效的荧光共振能量转移(FRET)。而野生型DNA与挂锁式探针有错配碱基,不能使其连接成环,不能形成RCA反应。根据二者荧光信号的显著差异可实现突变型DNA高灵敏度和特异性的检测,可精确测定1%的突变。2、设计含有9个碱基的环形DNA探针,基于汞离子可以特异性连接T-T碱基,即形成T-Hg2+-T结构,设计一段含有9个T碱基序列的引物,它能与含有多个T碱基的环形探针在汞离子的作用下结合。再利用DNA聚合酶的顶替作用,以环形探针为模板进行滚环扩增。以荧光染料SYBR GreenⅠ检测RCA产物,可实现汞离子的高灵敏度检测,汞检出限为1 nmol/L。