【摘 要】
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[目的]建立从粗老茶叶中提取WECOT、COTCP的最佳提取工艺,对WECOT、COTCP中的成分进行含量测定,检测重金属含量及农药残留量,并探究WECOT、COTCP对糖尿病小鼠的血糖、血脂、胰岛β细胞功能及内脏器官的作用。[方法]采用水浸提法,通过单因素实验及正交实验,确定WECOT的最佳提取工艺,水提醇沉法提取COTCP。直接干燥法测定WECOT、COTCP中的水分含量,福林酚法测定WECO
【基金项目】
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云南省高校建设平台（K1322203）,云南省高校云南特色植物多糖工程研究中心；
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[目的]建立从粗老茶叶中提取WECOT、COTCP的最佳提取工艺,对WECOT、COTCP中的成分进行含量测定,检测重金属含量及农药残留量,并探究WECOT、COTCP对糖尿病小鼠的血糖、血脂、胰岛β细胞功能及内脏器官的作用。[方法]采用水浸提法,通过单因素实验及正交实验,确定WECOT的最佳提取工艺,水提醇沉法提取COTCP。直接干燥法测定WECOT、COTCP中的水分含量,福林酚法测定WECOT、COTCP中的茶多酚含量,茚三酮比色法测定WECOT、COTCP中的游离氨基酸含量,考马斯亮蓝法测定WECOT、COTCP中的蛋白质含量,蒽酮-硫酸法测定COTCP中的中性多糖含量,间羟基联苯法测定COTCP中的酸性多糖含量,紫外-可见分光光度法测定WECOT、COTCP中的茶色素含量,ICP-MS法测定WECOT、COTCP中的重金属含量,LC-MS、GC-MS法测定WECOT、COTCP中的农药残留量。通过链脲佐菌素腹腔注射诱导小鼠糖尿病模型,考察WECOT、COTCP对糖尿病小鼠血糖、体重、饮水饮食量、器官指数的影响。全自动生化分析仪测定小鼠的血清转氨酶、血脂四项,酶联免疫法测定小鼠的血清胰岛素,计算胰岛β细胞相关功能指数。[结果]通过单因素实验和正交设计实验得到WECOT的最佳提取条件,水提醇沉法得到COTCP的最佳提取条件;直接干燥法测定得到WECOT中的水分含量为0.65%,COTCP中的水分含量为1.00%;福林酚法测定得到WECOT中茶多酚的含量为21.83%,COTCP中茶多酚的含量为0.25%;茚三酮比色法测定得到WECOT中游离氨基酸含量为0.13%,COTCP中游离氨基酸的含量为0.13%;考马斯亮蓝法测定得到WECOT中可溶性蛋白含量为3.17%,COTCP中可溶性蛋白含量为3.30%;蒽酮-硫酸法测定COTCP的中性多糖含量为6.40%;间羟基联苯法测定得到COTCP的酸性多糖含量为4.60%;紫外-可见光分光光度法测定得到WECOT中茶黄素、茶红素、茶褐素的含量分别0.37%、6.85%、28.73%;紫外-可见光分光光度法测定得到COTCP中茶黄素、茶红素、茶褐素的含量分别0.15%、0.90%、27.27%;ICP-MS 法测定得到 WECOT、COTCP 中的重金属含量均未超过限度,符合标准规定;LC-MS、GC-MS法测定得到WECOT、COTCP中的农药残留量均未超过限度,符合标准规定。WECOT、COTCP对糖尿病小鼠的作用研究结果表明,高、中、低剂量WECOT组能显著降低糖尿病小鼠的血糖（P<0.01、P<0.01、P<0.01）,且高、中剂量组与二甲双胍组相比没有统计学差异。而高、中、低COTCP组血糖值与模型组相比没有统计学差异（P>0.05）。高、中剂量WECOT组有降低血糖曲线下面积、改善糖耐量的作用（P<0.01、P<0.05）。高、中剂量WECOT组,高、中、低剂量COTCP组均能降低糖尿病小鼠的总胆固醇（P<0.05）;低剂量WECOT组,中、低剂量COTCP组均能降低糖尿病小鼠甘油三酯的含量（P<0.05）;WECOT、COTCP均不能降低糖尿病小鼠血清中的VLDL。高、中、低剂量WECOT组能升高糖尿病小鼠的血清胰岛素含量,但没有统计学差异。高、中、低剂量WECOT还能改善糖尿病小鼠的胰岛素敏感指数（P<0.05）,COTCP组对糖尿病小鼠的血清胰岛素含量、胰岛素分泌指数、胰岛素敏感指数均无改善作用。WECOT高、中剂量组能使糖尿病小鼠的肝脏指数降低（P<0.05）;与正常小鼠比较,模型组小鼠的脾脏指数、胸腺指数没有统计学差异;高剂量WECOT组能降低糖尿病小鼠的ALT（P<0.05）,与正常组比较无统计学差异;模型组小鼠的AST、GGT与正常组小鼠相比,无统计学差异。高剂量WECOT组能改善糖尿病小鼠多饮多食的症状,中、低剂量WECOT组,COTCP组均没有改善糖尿病小鼠多饮多食的作用。WECOT、COTCP组均没有改善糖尿病小鼠体重减轻的作用。[结论]本研究建立了从粗老茶叶中提取WECOT、COTCP的最佳工艺,并通过含量测定,发现WECOT是一种含有茶多酚、氨基酸、蛋白质、茶色素等物质的混合物,COTCP中茶多酚、茶色素的含量明显减少。WECOT、COTCP中的重金属含量、农药残留量均未超过限度,符合标准规定。WECOT能降低糖尿病小鼠的血糖,改善机体的葡萄糖耐量,升高血清胰岛素,增强机体对胰岛素的敏感性;STZ诱导的糖尿病模型还会引发脂质代谢紊乱以及肝脏的损伤,模型组的CHO、TG和VLDL升高,与正常组相比,有统计学差异,WECOT不仅可降低CHO、TG,还可降低ALT,减轻肝脏炎症,降低肝脏指数,保护肝脏,同时还能缓解糖尿病小鼠多饮、多食、多尿症状。COTCP能降低糖尿病小鼠的CHO、TG,但没有降低血糖、增强胰岛β细胞功能、改善“三多一少”症状、保护肝脏的作用。
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