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喉鳞状细胞癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一,95%-98%的喉部恶性肿瘤为鳞状细胞癌,目前其主要的治疗手段是以根治性手术辅以放疗或精确的放疗为主,在早期患者可以获得比较好的局部控制率,但不能预防或减少远处转移,对于中晚期患者常规治疗的疗效不尽人意,大概局部复发率27-61%、远处转移率18-21%、五年生存率27-34%,随着肿瘤生物学的发展许多生物学治疗的新技术运用到临床,实际运用中许多现象和结果至今都无法解释。头颈部肿瘤的浸润和转移是影响患者生存率的主要原因,但肿瘤由原发灶向周边组织浸润以致发生远处转移的机制目前尚未清楚,癌细胞是如何获得浸润能力的尚不清楚!探索新的、特异性高的肿瘤标志物,对提高喉癌患者的预后和进一步明确喉癌由原发灶向周边组织浸润以致发生远处转移的机制有重要意义。肝再生磷酸酶-3(PhosPhatase of regenerating liver-3, PRL-3)是新近发现的蛋白酪氨酸磷酸酶,其通过蛋白去磷酸化实现调节蛋白功能,参与各种细胞的生命活动,研究表明,PRL-3通过促进细胞增殖、迁移、侵袭、粘附及血管生成等途径参与了多种肿瘤的发生,浸润及转移。基质金属蛋白酶-14(Matrix metailo Proteinase-14, MMP-14)属膜型基质金属蛋白酶类,存在于细胞膜上,是一种跨膜蛋白,具有降解细胞外基质的能力,这是恶性肿瘤形成的必须条件之一。CD105又名endoglin,是一种糖蛋白,CD105阳性染色主要定位于新生血管内皮细胞的细胞膜和细胞质,在大血管内皮细胞中不表达,是理想的血管内皮细胞标记物,是计数肿瘤微血管密度(MVD)的金标准即CD105-MVD。目前,国内外关于PRL-3的研究主要集中在腺癌方面,其在鳞癌方面的研究尚少,在喉鳞癌方面的研究国内外还未见报道。PRL-3参与肿瘤浸润和转移的机制尚不清楚,有文献报道PRL-3可能通过基质金属蛋白酶和血管生成途径参与肿瘤的浸润和转移,但PRL-3、MMP-14及CD105在喉鳞癌中的表达及相关性尚未见报道。本课题应用HE染色和免疫组化法对人喉鳞癌中的PRL-3、MMP-14蛋白的表达进行检测,并用CD105标记肿瘤组织的微血管密度(CD105-MVD),旨在探索其与人喉癌的发生、浸润和转移的关系,寻找可能预测喉癌浸润和转移的肿瘤标志物,为喉鳞癌患者的预后提供有益的观测指标,并为进一步的机制研究提供理论依据。目的检测PRL-3、MMP-14在人喉鳞癌、相应癌旁组织和正常喉黏膜组织中的表达,并用CD105标记微血管密度(CD105-MVD),探讨PRL-3、MMP-14和CD105-MVD在喉鳞状细胞癌各临床病理因素中的作用及相关性,旨在探索其与人喉癌的发生、浸润及转移的关系,寻找可能预测喉癌浸润和转移的肿瘤标志物,为喉鳞癌患者的预后提供有益的观测指标,并为进一步的机制研究提供理论依据。材料与方法1、研究对象选择郑州大学第一附属医院2006年1月～2008年12月收治的69例喉鳞状细胞癌患者的癌组织蜡块标本,其中高分化鳞状细胞癌28例,中-低分化鳞状细胞癌41例(低分化癌病例较少,与中分化病例合为中-低分化组)。伴淋巴结转移阳性者25例,淋巴结转移阴性者44例。按国际抗癌协会(UICC) TNM分类标准(2002)分期：Ⅰ期11例,Ⅱ期15例,Ⅲ期27例,Ⅳ期16例。病人年龄在40岁至84岁之间(平均62岁),男67例,女2例,所有患者临床资料完整,术前均未作放疗、化疗及任何免疫治疗。另取35例同批患者的癌旁组织,32例正常喉黏膜组织作对照,癌旁组织取自肉眼观察距肿瘤边缘1.0 cm以外的喉黏膜组织,均经病理证实为鳞状上皮不典型增生,未发现癌细胞。2、实验方法采用免疫组织化学方法检测69例人喉鳞状细胞癌组织、35例相应癌旁组织和32例正常喉黏膜组织中PRL-3和MMP-14的表达情况,并用CD105作为血管内皮标记物对喉癌组织的MVD进行标记,结合临床病理因素分析。3、统计学处理采用SPSS18.0软件包进行统计分析,样本率的比较采用x检验,计量资料用x±s表示,均数比较采用t验,PRL-3、MMP-14与CD105-MVD相关性采用Spearman等级相关分析,以a=0.05为检验水准。结果1、PRL-3在喉鳞癌组织中的阳性表达率(65.22%)高于癌旁组织(17.14%)和正常喉黏膜组织(15.63%),差异有统计学意义(P<0.01)。淋巴结转移组的PRL-3阳性表达率明显高于无淋巴结转移组,差异具有统计学意义(P<0.05)。PRL-3的表达与病理分期、组织分化程度及淋巴结转移相关,与肿瘤原发部位、性别及年龄无关。2、MMP-14在喉鳞癌组织中的阳性表达率(76.81%)高于癌旁组织(31.43%)和正常喉黏膜组织(25.00%),差异显著,有统计学意义(P<0.01)。淋巴结转移阳性组的MMP-14蛋白阳性表达率明显高于淋巴结转移阴性组,差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。MMP-14的表达与病理分期、组织分化程度和淋巴结转移相关,与肿瘤原发部位、性别及年龄无关。3、临床病理分期较晚的Ⅲ～Ⅳ的CD105-MVD (12.7907±4.16080)明显高于Ⅰ～Ⅱ期(9.8846±4.13112),淋巴结转移阳性组的CD105-MVD(13.4000±4.36845)高于无淋巴结转移组(10.7273±4.08835),差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。CD105-MVD值与分化程度、原发部位、年龄及性别无关,比较差异无统计学意义(P>0.05)。4、PRL-3表达与CD105-MVD呈正相关(γs=0.811,P<0.01)；MMP-14表达与CD105-MVD呈正相关(r=0.867,P<0.01)；5、PRL-3蛋白与MMP-14蛋白的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05),但PRL-3蛋白的表达与MMP-14的表达呈正相关(r=0.367,P<0.01)。1、PRL-3、MMP-14参与了喉鳞状细胞癌的发生、浸润及转移,对喉鳞癌的诊断有重要参考价值；2、PRL-3与MMP-14的表达呈正相关,二者可能促进喉癌的浸润和转移,可联合作为喉鳞癌标志物,对临床治疗方案的选择及评估预后有一定的参考价值；3、CD105是理想的肿瘤新生血管标记物,CD105-MVD可作为预测喉癌转移及评估预后的重要指标；4、PRL-3、MMP-14与肿瘤血管的形成密切相关,在喉鳞状细胞癌形成中起重要作用。