鸡、鸭法氏囊活性肽的生物学特性及其原核表达

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采用超滤法从正常鸡、鸭法氏囊组织中提取分子量小于1000Da的物质,分别以薄层层析法和高压液相色谱法检测其主要成分,证明两种超滤液中均有法氏囊活性肽(囊素三肽,bursin,BS)的存在,分别计算鸡、鸭法氏囊提取物中的囊素三肽的含量。薄层层析方法求得鸡法氏囊提取物中的BS含量为1.436mg/mL,鸭法氏囊提取物中的BS含量为4.035mg/mL;高压液相色谱的方法求得鸡法氏囊提取物中的贴含量为1.199mg/mL,鸭法氏囊提取物中BS含量为3.316mg/mL。 将超滤获得的法氏囊活性肽分别以不同剂量肌肉注射21日龄SPF鸡,同时颈部皮下注射IBD胚毒或细胞毒灭活苗,结果表明:鸡、鸭法氏囊活性肽都能够缩短IBD油苗诱导产生抗体的时间,提高抗体水平,使鸡可以在比较短的时间内获得坚强的免疫。0.4mLCBS胚毒组和0.8mLCBS细胞毒组或0.8mLDBS胚毒和细胞毒组的AGP抗体滴度平均比免疫对照组高2个滴度。将法氏囊活性肽与IBD活苗联合免疫鸡,结果表明:不同剂量的CBS和DBS都可以对不同日龄鸡IBD抗体的产生有不同程度的促进作用;还可以减少弱毒对鸡法氏囊组织的损伤,加快其修复。试验中还发现,BS对鸡体有一定的增重作用从而提高了饲料报酬。 将不同剂量BS与兔瘟灭活苗同时免疫家兔,高剂量的DBS、CBS组可使兔瘟HI抗体水平较免疫对照组提高2-3个滴度。T-淋巴细胞转化试验表明:BS可短暂促进T-淋巴细胞的活化。同时通过增重试验证明BS对哺乳动物也具有增加体重的作用。 尽管对BS的研究已经相当广泛深入,但在分子生物学方面仍属空白,尤其是BS的克隆与表达,目前为止国内外仍未见报道。本试验首次尝试将5个BS基因以色氨酸串联进行克隆、表达,并获得成功,充分证明了BS基因可以通过扩增在大肠杆菌中得到表达从而获得大量纯化的BS。但整个表达体系还不够完善,仍需进一步的研究与探索。
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