论文部分内容阅读
五加科五加属药用植物刺五加Eleutherococcus senticosus(Rupr.&Maxim.)Maxim.和短梗五加E.sessiliflorus(Rupr.&Maxim.)S.Y.Hu广泛的分布于吉林省东部山区和黑龙江的大小兴安岭地区。黄酮类化合物和皂苷类化合物是刺五加叶和短梗五加叶的主要活性成分,具有多种生物活性。本论文对源于刺五加叶和短梗五加叶有效部位,有效成分的含量测定方法及提取分离工艺进行了研究,并依据前人关于镇静催眠和抗血小板聚集抗血栓的报道及课题组的预实验,探索刺五加叶和短梗五加叶药理活性,筛选出药效成分,初步研究其作用机制。主要研究内容和结果如下:第一章刺五加叶和短梗五加叶质量研究(1)在定性研究中1)建立了针对Chiisanoside的薄层鉴别方法,采用已确定的薄层色谱鉴别方法,对来自吉林省内15个地区的短梗五加叶和刺五加叶样品进行了薄层鉴别。2)建立了针对金丝桃苷的薄层鉴别方法,采用已确定的薄层色谱鉴别方法,对来自吉林省内16个地区的刺加叶和15个地区的短梗五加叶样品进行了薄层鉴别。(2)在定量研究中1)建立了适合刺五加叶和短梗五加叶样品的羽扇豆烷型三萜总皂苷含量测定的紫外-可见分光光度法,采用香草醛冰醋酸-高氯酸-乙酸乙酯显色法进行显色。并进行方法学考察。2)建立了适合刺五加叶和短梗五加叶样品的总黄酮含量测定的紫外-可见分光光度法,采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色。并进行方法学考察。3)建立了适合刺五加叶和短梗五加叶样品的chiisanoside含量测定的HPLC法,并进行方法学考察。4)建立了适合刺五加叶和短梗五加叶样品的黄酮类成分含量测定的HPLC法,并进行方法学考察。(3)在有效部位和有效成分制备工艺中,因刺五加叶和短梗五加叶化学成分相似,故选择刺五加叶作为实验材料,选择超声提取方式作为最佳提取方式。通过动态吸附和静态吸附实验选择D101树脂作为纯化羽扇豆烷型三萜总皂苷和chiisanoside的最佳树脂,选择聚酰胺树脂作为纯化总黄酮和金丝桃苷的最佳树脂。通过聚酰胺树脂纯化金丝桃苷,通过D101树脂纯化chiisanoside。进一步分离纯化金丝桃苷和chiisanoside,选择硅胶层析纯化金丝桃苷和chiisanoside。(4)在刺五加叶和短梗五加叶质量评价中。采集刺五加叶,以制备金丝桃苷为目的,6月28日(花苞期后期)选择阴干方式处理样品,6月28日(花苞期后期)后选择杀青方式处理样品;以制备chiisanoside为目的,选择杀青处理方式处理样品;以制备羽扇豆烷型总三萜皂苷为目的,选择杀青方式处理样品;以制备总黄酮为目的,6月13日(花苞期前期)前选择阴干方式处理样品,6月13日(花苞期前期)后选择杀青方式处理样品。不同产地的刺五加叶中金丝桃苷的含量在0.12-4.64mg/g范围内,木樨草苷的含量在0.02-3.18mg/g范围内,槲皮素的含量在0.01-0.10mg/g范围内。不同产地刺五加叶中chiisanoside的含量在5.12-10.25mg/g范围内。不同产地刺五加叶中总皂苷的含量在31.20-52.14mg/g范围内。不同产地刺五加叶中总黄酮的含量在21.67-58.37mg/g范围内。采集短梗五加叶。以制备金丝桃苷为目的,7月19日(花苞期前期)前选择阴干方式处理样品,7月19日(花苞期前期)后选择杀青方式处理样品;以制备chiisanoside为目的,7月5日(生长期后期)前选择阴干方式处理样品,7月5日(生长期后期)后选择杀青方式处理样品;以制备羽扇豆烷型总三萜皂苷为目的,7月19日(花苞期前期)前选择阴干方式处理样品,7月19日(花苞期前期)后选择杀青方式处理样品;以制备总黄酮为目的,7月19日(花苞期前期)前选择阴干方式处理样品,7月19日(花苞期前期)后选择杀青方式处理样品。不同产地的短梗五加叶中金丝桃苷的含量在0.11-3.27mg/g范围内,木樨草苷的含量在0.01-1.24mg/g范围内,槲皮素的含量在0.01-0.35mg/g范围内。不同产地短梗五加叶中chiisanoside的含量在20.86-68.30mg/g范围内。不同产地短梗五加叶中总皂苷的含量在61.56-91.70mg/g范围内。不同产地刺五加叶中总黄酮的含量在60.14-97.23mg/g范围内。第二章刺五加叶和短梗五加叶抗血小板和抗血栓作用研究刺五加叶和短梗五加叶黄酮类组分是二者发挥抗血小板聚集、抗血栓作用的主要组分;其中尤以短梗五加叶总黄酮组分作用效果最佳;短梗五加叶总黄酮可以通过升高血清c AMP水平,降低TXB2水平,抑制血小板聚集,进而发挥抗血栓作用。第三章刺五加叶和短梗五加叶镇静催眠作用研究通过小鼠自主活动试验,激动剂拮抗剂联合给药及对海马区相关神经递质影响试验,发现了刺五加叶和短梗五加叶中富含羽扇豆烷型三萜皂苷的ASL-TS、ASF-TS有效部位及有效成分chiisanoside具有显著的镇静催眠活性,并且其镇静催眠作用与中枢5-HT、GABA能神经系统有关。