目的:观察凋亡抑制因子生存素（survivin）在病毒感染不同时间点心肌细胞中的表达规律，并初步探讨survivin在病毒性心肌炎（viral myocarditis，VCM）中作用及其可能机制。　　方法:体外培养新生Sprague Dawley(SD)大鼠乳鼠原代心肌细胞，并予柯萨奇病毒B3(coxsachievirus B3，CVB3)感染原代心肌细胞，建立病毒性心肌炎细胞模型，观察感染后心肌细胞的病变、搏动情况改变，并用乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase，LDH)细胞毒性实验评估心肌细胞损伤程度，运用荧光定量PCR(RT-PCR)扩增出CVB3的特异性条带。复制VCM细胞模型，在CVB3感染心肌细胞0h、12h、24h、36h、48h、60h后，显微镜下观察心肌细胞形态、搏动变化及CPE形成情况，通过RT-PCR和蛋白免疫印迹法（Western Blot，WB）两种方式，检测感染病毒不同时间对细胞survivin表达的影响，应用AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡情况，WB技术检测cleaved-caspase-3蛋白表达量，对survivin表达量与细胞凋亡率进行相关性分析。通过构建survivin基因过表达腺病毒转染心肌细胞验证survivin在病毒性心肌炎中作用，将原代心肌细胞分为3组:正常对照组（未进行病毒转染），空病毒组（只携带GFP，不能过表达survivin），腺病毒组(既携带GFP，又能过表达survivin)，以正常细胞组作为对照，检测survivin过表达腺病毒转染对原代心肌细胞产生的影响及病毒转染效果;将细胞分为3组:感染对照组（仅感染CVB3病毒），空病毒组（只携带GFP，不能过表达survivin），腺病毒组（既携带GFP，又能过表达survivin），于细胞转染后第3天，将CVB3病毒感染细胞60h，以感染细胞组作为对照，观察各组心肌细胞形态、搏动变化及CPE形成情况，AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡情况，WB技术检测蛋白cleaved-caspase-3蛋白表达量，探讨surivin过表达后对细胞凋亡的影响。　　结果:1.原代心肌细胞培养48h后可见心肌细胞呈圆形、梭形或者多角形，边界清晰，伪足明显，胞质及胞核亦清晰可见，呈自发性节律性搏动，在感染CVB3后，心肌细胞逐渐出现了细胞病变，感染48h心肌细胞开始出现团缩变圆，搏动减弱、不规则，至60h时大部分细胞脱壁、溶解，搏动停止。感染CVB3病毒后心肌细胞毒性率较对照组显著增高，RT-PCR在感染组心肌细胞中扩增出了CVB3的特异性条带。2.正常心肌细胞存在survivin低表达，感染CVB3后，心肌细胞survivin mRNA表达明显增加，且呈时间依赖性，感染CVB3后12h，实验组心肌细胞survivin mRNA表达较对照组明显增加，为表达最高峰（2.83±0.36）vs（1.03±0.21）(n=6)（P＜0.05），随后survivin mRNA表达逐渐减少，于60 h时至最低点，甚至低于正常组（0.41±0.18）vs（1.04±0.11）(n=6)（P＜0.05）。感染CVB3后，心肌细胞survivin蛋白表达明显增加，且呈时间依赖性，感染CVB3后12h，实验组心肌细胞survivin蛋白表达较对照组明显增加，为表达最高峰（1.88±0.39）vs（1.08±0.07）(n=6)（P＜0.05），随后survivin蛋白表达逐渐减少，60 h时至最低点，甚至低于正常组（0.47±0.41）vs（1.16±0.09）(n=6)（P＜0.05）。　　3.对照组心肌细胞不同时间点均未见凋亡发生及cleaved-caspase-3表达，而感染CVB3病毒后实验组心肌细胞开始出现少量凋亡及cleaved-caspase-3表达，并且随着感染时间延长，心肌细胞凋亡率及cleaved-caspase-3表达呈逐渐上升趋势，凋亡率于感染60h达最高值（35.85％±3.76％）vs（0.25％±0.17％）(P＜0.05)，cleaved-caspase-3表达量也于感染60h至高峰(3.46±0.23)vs(1.08±0.12)(P＜0.05)。　　4.心肌细胞survivin基因表达量与细胞凋亡率存在显著负相关(r=0.718，P＜0.01);心肌细胞survivin蛋白表达量与细胞凋亡率亦存在显著负相关（r=0.727，P＜0.01）。　　5.空病毒与腺病毒载体转染后，细胞活力和形态均未受到影响，腺病毒本身对原代培养的正常心肌细胞无明显细胞毒性及影响。构建的腺病毒能够从mRNA和蛋白水平有效改变原代培养的心肌细胞survivin的表达(mRNA水平:过表达病毒转染后，相对于对照组:1.03±0.32;空病毒组1.12±0.19，P＞0.05;腺病毒组:8.17±2.950，P＜0.05;蛋白水平:过表达病毒转染后，相对于对照组:1.06±0.22;空病毒组0.94±0.13，P＞0.05;过表达病毒组:10.43±3.42，P＜0.05）。6.细胞转染过表达survivin腺病毒后，镜下可见细胞损伤较感染对照组明显减小，心肌细胞病变积分较感染对照组明显下降（感染对照组:2.79±0.64;空病毒:2.83±0.49;腺病毒:2.07±0.31，P＜0.05）;细胞凋亡率明显下调（感染对照组:39.67％±9.55％;空病毒:34.84％±6.14％，P＞0.05;腺病毒:25.43％±8.65％，P＜0.05）;cleavedcaspase-3表达明显下调（感染对照组:1.05±0.12;空病毒:1.09±0.28，P＞0.05;腺病毒:0.47±0.26，P＜0.05）。　　结论:1.CVB3病毒感染能激活survivin蛋白表达，在VCM早期参与抗心肌细胞凋亡作用。2.Survivin表达可能通过抑制cleaved-caspase-3的活性，从而抑制凋亡在VCM疾病发展过程中起到心肌保护作用。