论文部分内容阅读
目的:长期的脑血流灌注不足,会导致体内多脏器内过度的氧化应激的产生。血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)是血红素代谢分解过程中的关键酶和限速酶,也是体内重要的内源性抗氧化体系,具有显著的抗氧化应激能力。本课题通过建立老年SD大鼠脑血流低灌注模型,研究HO家族中重要成员HO-1和HO-2在肝脏中的表达,并探讨其在脑血流灌注不足引起的损伤时对肝脏的作用及意义。方法:采用持久性双侧颈总动脉结扎法(2VO)致老年SD大鼠脑血流灌注不足,首先检测脑皮质血流的变化情况;采用苏木素-伊红染色观察大鼠肝细胞形态学改变;采集下腔静脉的静脉血检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;采用ELISA法检测肝脏组织中HO的活性变化;采用免疫组织化学法检测肝脏组织中HO-1和HO-2的表达情况;并分别通过RT-PCR和Western blot法检测肝脏组织中HO-1和HO-2在mRNA和蛋白水平的表达。结果:术后第7天,大鼠皮质血流的面积比值明显降低,达到最低值,而术后14、21、28天,大鼠皮质脑血流的面积比值逐渐升高,到28天基本恢复的正常水平。HE染色结果表明:与假手术组比,在术后第1天,肝细胞因缺血出现水样变性,即细胞体积明显增大,胞质变得透明,第7天其水样变性最为显著;在术后14、21、28天,肝细胞的水样变性有所改善,但仍未恢复到正常水平。肝功能检测结果显示:ALT和AST在2VO术后7 d明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),但增高范围仍属于正常,无临床意义;随着时间的延长,ALT和AST的含量逐渐降低,到28 d,数值基本恢复至假手术组的水平。免疫组化、RT-PCR和Western blot显示:与假手术组比较,HO-1在术后1d即有增加,并在第7d达到高峰(p<0.05),这样的变化与HO酶活性变化一致;而HO-2在慢性脑血流灌注不足的肝脏中却没有显著变化。结论:慢性脑血流灌注不足时,可导致肝细胞的形态结构有轻微的损伤,但肝功能基本正常,这与HO-1和血红素加氧酶活性的动态增加密切相关,这提示HO-1在慢性脑血流灌注不足的肝脏中起着保护作用。