本研究以原核表达的VP5蛋白为免疫原制备特异性单克隆抗体,为试验研究建立细胞系提供检测方法;成功构建了IBDV VP5基因的真核表达载体和稳定表达VP5蛋白的Vero E6细胞系,为深入研究VP5对病毒复制和致病力的影响奠定基础。构建的重组质粒pET30a-Gx(+12aa)VP5、pET28a-GxVP5、pET28a-GtVP5分别转化宿主菌BL21(DE3),在IPTG诱导下均成功表达了24 kDa的Gx-VP5及23kDa的Gt-VP5融合蛋白,并都以包涵体形式存在。将Gx-VP5纯化后的蛋白免疫8周龄BALB/c鼠,ELISA分析表明制备的抗血清效价在1:25600以上,Western blot分析VP5表达产物能与抗6×His mAb及抗IBDV多克隆抗血清发生反应,具有良好的免疫反应特异性;以原核表达的融合蛋白pET30a-GxVP5作为抗原免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞常规融合,获得了4B4、6D12、3E8三株能稳定分泌抗IBDV VP5的杂交瘤细胞株,亚类鉴定均为IgG1型,以三株杂交瘤细胞制备的腹水ELISA效价分别为5×10~4、3.5×10~4、3×10~4,特异性实验表明三株单抗能与IBDV Gt株反应,以单抗介导的间接免疫荧光检测表达Gt-VP5的Vero E6细胞,可以见到特异的荧光;构建的真核表达质粒pcDNA3.1-Gt VP5,在脂质体介导下导入Vero E6细胞,经G418筛选后得到稳定转染细胞株,用有限稀释法获取亚克隆细胞株,分别命名为C6A8、F12、D12,然后通过间接免疫荧光和RT-PCR检测VP5基因在Vero E6细胞中的表达,获得了稳定表达VP5蛋白的Vero E6细胞系,在此基础上,通过蚀斑等试验证实VP5蛋白能降低病毒毒力,减弱病毒的致病力,并通过RNAi技术筛选获得的siRNA可以有效干扰VP5蛋白的表达,但不能有效干扰病毒的复制。