阿片类药物作为强效镇痛药，在临床上有着不可替代的地位。但是由于此类药物具有耐受和依赖的缺点，不但使临床应用受到局限，更因其成瘾而导致滥用，给人类健康及社会文明都带来了严重危害。目前，尚未找到有效的方法可以预防和根除阿片所导致的成瘾。这主要是因为成瘾的细胞内制与过程不明，关键性作用靶点不清。基于目前阿片类药物成瘾机制不明的研究现状，本论文选择酵母双杂交系统为技术平台，以阿片μ受体胞内部分作为诱饵，寻找细胞内与受体有特异性作用的蛋白质，以期对受体后调节机制进行进一步探讨。 在双杂交系统中，选择阿片μ受体C末端作为诱饵，以吗啡成瘾大鼠脑cDNA作为待筛选文库。以阿片μ受体全长序列为模板，扩增得到长度约为200bp的片段，经测序与同源性检索，确定扩增片段序列与μ受体C末端完全一致。而后C末端片段与载体pGBKT7分别经EcoRⅠ-BamHⅠ酶切，而后连接构建重组质粒。利用小规模酵母双杂交法，检测诱饵载体的自转录活性与细胞毒性，结果表明以C末端作为诱饵，对酵母细胞无毒性，也没有自身激活报道基因的功能。 从临床应用与滥用趋势分析，在μ受体激动剂中，吗啡是最常见的药物之一。长期给用吗啡，建立起大鼠吗啡成瘾模型。提取大鼠全脑RNA，并以其为模板经反转录、LD-PCR最终获取双链cDNA。将cDNA与载体pGBKT7-Rec连接，而后转化AH109，于选择性培养基SD/-Leu上培养，三天后，平板上长出直径在1-3mm的菌落，刮取菌落收集后组成待筛选文库。 将不同交配型的酵母菌株Y187(诱饵)与AH109(待筛选文库)进行交配，交配混合液涂布于不同选择培养基上，经多次筛选后利用改良酵母菌落PCR对阳性克隆进行大规模扩增，对相同带型的克隆进行简并。优先选择长度在1kb左右的片段，进行凝胶回收后进行测序。 序列信息经整理合并后，得到49种基因片段序列，其中从吗啡成瘾大鼠脑cDNA中，初步筛选得到三种编码功能蛋白的基因，分别为编码富含脯氨酸蛋白(PRP)，编码胆碱乙酰化酶基因，编码一类45KD的分泌蛋白，有资料表明前两种蛋白可能参与受体体内信号传导过程，其与受体生物相关性的确定尚需进一步通过实验来验证。