基于纳米金、核酸适配体的光谱分析及在蛋白检测中的应用

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纳米金由于其特有的表面效应、高催化性能、介电效应以及荧光效应被广泛的应用于分析化学。核酸适配体是一种单链DNA或RNA序列,具有与目标物质高度特异性结合的能力,同时能吸附到纳米金颗粒的表面,将纳米金-核酸适配体制成探针可用于很多物质和离子的检测。本论文主要研究了纳米金及核酸适配体的光谱特性及在蛋白检测中的应用,内容包括以下三个部分:(1)用改良的Frens法制备纳米金,采用紫外-可见分光光度法对制备的纳米金进行表征。将腺苷的核酸适配体吸附于纳米金表面,在pH=7.4的Tris-HCl缓冲体系下,腺苷与腺苷核酸适配体特异性结合,使纳米金分散于溶液中。在高浓度盐的环境下,分散的纳米金团聚,溶液的颜色由红色转为蓝色,利用紫外-可见分光光度法测定λ526及λ705的吸光度比值可以检测纳米金团聚程度,从而间接地检测腺苷的含量。(2)将凝血酶的核酸适配体吸附于纳米金表面,使纳米金在高浓度盐的环境下不发生团聚。当溶液中存在凝血酶时,由于凝血酶核酸适配体与凝血酶的特异性结合,凝血酶核酸适配体脱离纳米金表面,不受适配体保护的纳米金分散于溶液中,在高浓度盐的环境下,这部分纳米金发生团聚。团聚与分散的纳米金对荧光素的荧光猝灭作用相差较大,测定体系中荧光素荧光强度的变化,可检测纳米金团聚的程度,从而实现对体系中凝血酶的含量的检测。(3)人IgG的等电点为7.5-7.8,溶液pH值大于7.8,人IgG带负电荷,不会引起溶液中纳米金团聚;pH值小于7.5,人IgG带正电,可以引起纳米金团聚。分散的纳米金的紫外-可见的最大吸收峰在527nm,完全团聚的纳米金紫外-可见的最大吸收峰红移至765nm,纳米金在这两个紫外-可见吸收值的比值,即A527/A765,可作为衡量纳米金团聚程度的参数,从而可以定量检测人IgG。
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