论文部分内容阅读
背景及目的:胃癌是我国高发性肿瘤之一,严重威胁着人类的健康,其发病原因尚未十分清楚。目前胃癌的治疗仍不令人满意。以往的手术治疗配合放疗、化疗等措施难以取得更大进展,因此人们开始寻求其他新的治疗手段。研究发现多种化疗药物对肿瘤细胞作用不明显是由于药物影响细胞凋亡的分子机制造成。紫杉醇是从紫杉树皮中提取的一种具有独特结构的天然抗癌新药,通过抑制细胞内微管结构聚集,阻碍癌细胞分裂过程,使细胞周期停滞于G2/M期并诱导细胞凋亡。紫杉醇具有广泛的抗肿瘤作用,如卵巢癌、乳腺癌、黑素瘤、肺癌等。前期研究结果表明,紫杉醇可以通过诱导细胞凋亡而发挥杀伤胃腺癌细胞的作用,且在此过程中BH3-only亚家族成员中的Bim分子及Bcl-2家族成员中的Mcl-1分子出现表达上调。在前期研究的基础上,本实验探讨在紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡过程中,组织蛋白酶B（Cathepsin B）所发挥的作用,从而进一步探究抗微管化疗药物紫杉醇体外诱导细胞凋亡的分子通路,以寻找克服胃腺癌细胞对化疗诱导凋亡不敏感的有效途径。方法:采用不同浓度（0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μmol/L）的紫杉醇处理体外培养的SGC-7901、BGC-823胃腺癌细胞48h,再选取0.3μmol/L紫杉醇处理不同时间（0、6、12、24、36、48h）。PI染色,次日上流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Western blot检测Cathepsin B蛋白表达水平;JC-1染色检测线粒体膜电位在紫杉醇诱导的胃腺癌细胞凋亡中的变化;采用Cathepsin B特异性抑制剂CA-074（Me）与紫杉醇共同处理SGC-7901、BGC-823胃腺癌细胞,PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Western blot检测Cathepsin B蛋白表达水平,探讨Cathepsin B在紫杉醇诱导胃腺癌细胞凋亡中的作用。结果:紫杉醇对两种胃癌细胞均有明显诱导凋亡作用,且均呈时间相关性及剂量相关性。中分化的SGC-7901细胞株对紫杉醇诱导的凋亡的敏感性相对较高,而低分化的BGC-823细胞株却具有相对抵抗性。线粒体膜电位随着紫杉醇作用时间的延长而呈降低趋势,推断紫杉醇诱导的胃腺癌细胞凋亡主要通过线粒体凋亡途径。紫杉醇诱导的胃腺癌细胞凋亡,能被Cathepsin B特异性抑制剂CA-074（Me）有效抑制,凋亡抑制率达50%以上,说明Cathepsin B在紫杉醇诱导的胃腺癌细胞凋亡中起着很大的促进作用。在一定范围内,随着紫杉醇作用时间的延长和浓度的增大,Cathepsin B的表达水平均呈上调的趋势。结论:紫杉醇能通过诱导细胞凋亡杀伤胃腺癌细胞;紫杉醇诱导的胃腺癌细胞凋亡主要通过线粒体凋亡途径;Cathepsin B在紫杉醇诱导的胃腺癌细胞凋亡中发挥了很重要的促进作用。