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目的:本研究拟采用逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测肝癌组织及细胞中microRNA-205-5p(miR-205-5p)相对于癌旁组织及正常肝脏细胞的表达情况,明确miR-205-5p在肝癌发生、发展中是以促癌基因还是抑癌基因发挥作用。并进一步利用qRT-PCR技术检测肝癌细胞经5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理前后miR-205-5p的表达情况,初步确定miR-205-5p是否参与调控肝癌细胞的化疗耐药。其次利用miR-205-5p mimic及miR-205-5p inhibitor瞬时转染Bel-7402(Bel)细胞及亲本Bel-7402/5-Fu(Bel/Fu)耐药细胞,研究相应转染后肝癌细胞对5-Fu的敏感性。最后进一步通过生物信息学分析及western blot研究miR-205-5p介导肝癌细胞化疗耐药的作用机制。本研究为改善肝癌患者化疗疗效、研制新的肝癌靶向药物提供一定的依据。方法:第一部分采用qRT-PCR检测原发性肝癌组织及癌旁组织、肝癌细胞及正常肝细胞中miR-205-5p的表达含量,研究miR-205-5p在肝癌发生、发展中是以促癌基因还是抑癌基因发挥作用。第二部分利用CCK-8试剂检测Bel细胞、Bel/Fu细胞对5-Fu的IC50值;采用qRT-PCR检测不同浓度5-Fu处理前后Bel细胞中miR-205-5p的表达含量变化,进一步检测Bel细胞及Bel/Fu细胞中miR-205-5p的表达含量,初步确定miR-205-5p是否参与调节肝癌细胞的化疗耐药;利用miR-205-5p mimic和miR-205-5p inhibitor瞬时转染Bel细胞和Bel/Fu细胞,检测转染前后肝癌细胞miR-205-5p的表达情况,然后在转染基础上利用CCK-8试剂研究5-Fu对肝癌细胞增殖的影响。最后通过生物信息学分析验证PTEN为miR-205-5p的靶向目的基因,并运用western blot验证miR-205-5p通过调控PTEN/JNK/ANXA3通路介导肝癌的化疗耐药。结果:(1)MiR-205-5p在肝癌组织及细胞水平都是低表达的。(2)Bel细胞对5-Fu的IC50为5.498μg/ml,Bel/Fu细胞对5-Fu的IC50值为1073μg/ml。Bel细胞经5-Fu处理后miR-205-5p的表达明显升高,并且Bel/Fu细胞中miR-205-5p相对于Bel细胞是高表达的。Bel细胞瞬时转染miR-205-5p mimic后miR-205-5p表达明显升高,Bel/Fu细胞瞬时转染miR-205-5p inhibitor后miR-205-5p表达明显降低。瞬时转染miR-205-5p mimic的Bel细胞对5-Fu的敏感性降低,瞬时转染miR-205-5p inhibitor的Bel/Fu细胞对5-Fu的敏感性增强。最后经过生物信息学分析提示并证明PTEN是miR-205-5p的一个直接靶向目的基因,并且western blot进一步验证得出miR-205-5p通过调控PTEN/JNK/ANXA3通路介导肝癌细胞的化疗耐药。结论:(1)MiR-205-5p在肝癌的发生、发展中可能作为抑癌基因发挥作用。(2)MiR-205-5p在肝癌细胞经5-Fu处理后表达明显增加,Bel/Fu耐药细胞相对于亲本Bel细胞miR-205-5p也是高表达的,说明miR-205-5p参与了肝癌细胞的化疗耐药。而且利用miR-205-5p inhibitor联合5-Fu可以增加肝癌耐药细胞对5-Fu的敏感性。PTEN作为miR-205-5p的一个直接靶向基因,miR-205-5p可通过调控PTEN/JNK/ANXA3通路介导肝癌细胞的化疗耐药。本研究为改善肝癌患者化疗疗效、研制新的肝癌靶向药物提供一定的理论依据。