一种降解酶及其固定化酶对莠去津降解特性研究

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本文以莠去津作为主要的研究对象,对莠去津的气相色谱测定方法,莠去津降解酶的提取,固定化酶的制备以及降解酶和固定化酶的特性进行了研究,并对降解酶和固定化酶在消除生产废水中的莠去津的应用前景进行了初步的探讨。主要内容如下:1.介绍了莠去津的理化性质、国内外应用概况,以及由于其广泛应用所带来的环境污染问题;在对前人工作总结分析的基础上,对莠去津在环境介质中的残留动态、降解代谢、生态毒理、污染治理措施以及生物修复技术-酶的固定化进行了全面系统的综述,进而提出了作者要研究的问题。2.分别测定了降解菌HB-5的无细胞培养液、细胞粗酶提取液等对莠去津的降解能力,从而对莠去津降解酶进行定位。研究证明,对莠去津的降解主要是胞内酶在起作用。从高效降解菌HB-5中提取到的降解酶,在不含有莠去津的培养基中连续转接7次,会逐渐丧失对莠去津的降解代谢活性,由此判断该降解酶不是组成酶,而是诱导酶。3.初步研究了从高效降解细菌HB-5(Arthrobacter)中提取的降解酶的分离条件及降解酶对莠去津的降解性能。以牛血清白蛋白为标准蛋白测得粗提酶中可溶性蛋白含量为0.65 mg·mL-1;该酶在pH 8.0~pH 9.5之间,酶活力均能保持在最高酶活力的89%以上,降解莠去津的最适pH为8.5;在25℃~45℃的温度范围内能保持较好的降解活性,最适温度为35℃;进一步研究发现,该酶具有较好的热稳定性和pH稳定性,暴露在温度30℃~40℃,pH 6.0~pH 9.0的条件下2h仍能保持较高的酶活力;该酶与底物莠去津结合力强,对莠去津具有较好的降解效果,其米氏常数Km为0.3459mmol·L-1,Vmax为0.7518μmol·mg-1·min-1。4.研究了降解酶对其他三氮苯类除草剂的降解能力。结果表明,降解酶除了对莠去津具有较高的降解能力外,对三氮苯类除草剂扑草净和西玛津也具有一定的降解代谢能力,尤其对西玛津表现出类似于莠去津的降解活性。5.研究了降解酶的固定化方法。选取包埋剂海藻酸钠浓度为2.0%、3.0%、3.5%、4.0%,固定剂CaCl2浓度为2.0%、3.0%、4.0%、5.0%以及
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