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目的：对大鼠BMSCs的体外分离、培养、扩增、鉴定及其向感觉神经元诱导条件进行优化,建立本实验室快速稳定获取大鼠BMSCs及其转化为感觉神经元样细胞技术流程,为BMSCs内耳移植治疗感音神经性耳聋提供理论基础和技术规范。方法：1、体外利用密度梯度离心法采集分离培养纯化大鼠BMSCs,采用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD44、CD90、CD106、CD34、CD45表达情况，成骨及成脂诱导液诱导所获得细胞向成骨细胞、脂肪细胞分化,以茜素红及油红O染色法鉴定成骨分化中钙结节及脂肪分化中脂滴的形成。2、用两步法诱导大鼠BMSCs为感觉神经元样细胞：第一步用添加EGF和IGF-1诱导液诱导BMSCs为内耳神经前体细胞,细胞免疫荧光验证其表面蛋白SOX2和PAX8表达情况,第二步分别用BMP4诱导组和无BMP4诱导组继续向感觉神经元样细胞诱导,通过realtime-PCR比较各组间细胞内NeuroD、Neurog1、GluR4、NF-M基因mRNA水平,选取最优诱导方案。最后通过细胞形态学观察、细胞免疫荧光检测细胞表面蛋白Nestin、NeuN、GATA3、Calretinin、 β-Ⅲ tubulin、Tau表达情况,对最优方案诱导后的细胞进行鉴定。结果：1、通过规范化细胞制备技术获取大量形态均一贴壁生长细胞。流式细胞仪结果显示：细胞表面抗原CD44、CD90、CD106分别表达为99.9%、77.3%、99.5%；造血细胞来源的表面抗原CD34和CD45分别表达为3.22%和4%。成脂诱导后油红O染色可见脂滴,成骨诱导后茜素红染色可见橙红钙结节,证实我们获取大量高纯度的BMSCs。2、Realtime-PCR结果显示BMP、SHH和RA联合诱导能显著提升大鼠BMSCs内NeuroD、Neurog1、GluR4、NF-M基因mRNA水平。诱导后细胞具有神经元特殊形态,处于生长平台期,感觉神经元相关蛋白Nestin、NeuN、GATA3、Calretinin、β-Ⅲ tubulin、Tau阳性,证实我们成功的将BMSCs诱导为感觉神经元样细胞。结论：1、本实验成功建立和优化了BMSCs制备技术,规范了细胞采集、分离、培养及鉴定的流程,为获取高质量BMSCs提供了理论和实践参考。2、本实验成功建立了BMSCs诱导为感觉神经元样细胞转化技术；通过realtime-PCR技术、细胞形态学观察、细胞免疫荧光技术证明BMP4、SHH和RA联合诱导可获得高质量感觉神经元样细胞。