大肠杆菌O157VT噬菌体及VT毒力基因的研究

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本试验采用针对毒力因子vt1、vt2、eaeA、hlyA的多重PCR检测20株O157分离菌株。结果010920株检测到vt1、vt2、eaeA、hlyA四种毒力因子,020324株检测vt2、eaeA、hlyA三种毒力因子,其余18株菌株未检测到毒力相关基因。选择具有代表性的3株菌株进行小鼠毒力试验和Vero细胞毒性测定,结果显示不同菌株可引起Vero细胞不同程度的病变效应。对小鼠也具有不同的致病力,表明菌株毒力因子与致病力之间存在相关性。 本试验通过丝裂霉素C诱导只具有vt2基因无vt1基因的020324菌株释放噬菌体,利用多种指示菌经双层琼脂平板法来分离纯化VT2噬菌体,观察噬菌斑的特征,提纯病毒粒子进行电镜观察,并采用PCR的方法检测噬菌体中vt2基因。结果显示VT2噬菌体感染MC1061在双层琼脂平板上形成的噬菌斑小而混浊,多呈磨玻璃样;而首次感染大肠杆菌CC118(λpir),此后用MC1061分离的噬菌体再以MC1061为指示菌的在双层琼脂平板上形成小而清晰透明的噬菌斑。 根据GenBank中VT2毒素的基因序列设计2对引物扩增噬菌体上vt2基因的全长A、B亚单位。将vt2-A、vt2-B扩增产物纯化后,分别插入pMD18-T载体,测序结果登录GenBank,同时利用软件(DNAstar)推导氨基酸序列,并与GenBank中相应序列进行比较。
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