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目的：研究葛根素对成骨细胞MC3T3-E1增殖能力、分化能力、miRNA表达的影响以及其与Runx2基因表达的关系。方法：1.MTT法检测葛根素作用于MC3T3-E1细胞后成骨细胞的增殖能力,用终浓度为0.01mg/ml的葛根素处理,并设一个空白对照组,加入等体积的α-MEM培养液,每组设6个复孔分别继续培养24h、48h、72h后检测OD值。2.碱性磷酸酶活性检测葛根素对成骨细胞分化能力的影响,传代培养成骨细胞后,进行细胞爬片,等待细胞爬片成功后,弃掉培养液,用PBS清洗3次,依据ALP染色试剂盒说明书的方法,给细胞染色。3.葛根素作用于成骨细胞后,分别提取RNA和蛋白质,采用RT-PCR法检测Runx2的mRNA表达水平和和用western blot法检测Runx2蛋白表达水平。4.采用PicTar、Target Scan、等靶点预测软件预测靶向Runx2的miRNA,并与表达谱测定的葛根素作用MC3T3-E1前后miRNA变化作比较。5.采用RT-PCR验证葛根素作用MC3T3-E1前后靶向Runx2基因的miRNA表达量。6.构建Runx2 3’UTR/突变型Runx2 3’UTR重组质粒、合成miRNA-204mimics和miRNA-204NC共转染MC3T3-E1细胞,用双荧光素酶报告基因系统验证Runx2与miRNA-204的靶向关系。7.分别用miRNA-204inhibitor和miRNA-204mimics转染MC3T3-E1细胞,RT-PCR和western blot检测转染前后Runx2的mRNA表达量和蛋白表达量的变化。结果：葛根素作用后,与空白对照组比较：1.成骨细胞增殖能力提高；2.ALP活性提高；3.Runx2的mRNA和蛋白表达水平上升;4. miRNA表达谱和靶点预测软件预测靶向Runx2的miRNA共同有miR-204、miRNA-344f-5p; 5.PCR结果显示miRNA-204和miRNA-344f-5p表达水平下降,miRNA-2861表达水平上升,miRNA-23a-5p、 miRNA-770-5p、miRNA-871-5p表达水平无明显改变；6.双荧光素酶报告基因法结果显示,细胞转染48h后,只有Runx2 3’UTR+miRNA-204 mimics组荧光素蛋白的表达水平显著降低,说明只有miRNA-204可抑制Runx2 3’UTR报告基因的表达；7.过表达miRNA-204后Runx2的蛋白表达水平下降,干扰miRNA-204表达后Runx2的蛋白水平上升。结论：葛根素可提高成骨细胞增殖、分化能力,并调节可能靶向Runx2的miRNA,为进一步研究葛根素促进成骨细胞发育的机理研究提供可靠的依据。