梅花鹿卵泡刺激素的基因克隆、表达和活性分析

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卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)广泛用于牛、羊等动物的超排、人工受精等繁殖育种工作中。可以通过几种方法获得FSH,如从绝经期妇女尿中提取,或从猪、牛、羊等动物脑垂体中提取或采用重组DNA技术生产重组FSH。从绝经期妇女尿中及猪、牛、羊等动物脑垂体中提取的FSH存在严重问题,如材料来源有限、提取纯化工作费时、费力、质量差、纯度低、常有其它激素的污染等。采用基因重组技术生产重组FSH就可解决这些问题。例如解决材料来源问题、简化生产工艺、降低生产成本、批次间差异最小、并且没有其它激素污染、无抗体反应。本文采用RT-PCR、SDS-PAGE、Western blot、Radioimmunoassy等方法首次研究了梅花鹿FSH的基因克隆、表达和活性分析,结果如下: 1.梅花鹿FSH-α亚基基因是由363个核苷酸组成,编码120个氨基酸。该序列已提交GenBank被接受,序列号为AY066018。将梅花鹿FSH-α亚基基因核苷酸序列与其它动物该序列相比,结果显示梅花鹿与山羊的同源性最高,达到99%,它们之间只有3个核苷酸不同。梅花鹿与豚鼠、狨的核苷酸同源性最低,为83%~84%,有57~59个核苷酸不同。将梅花鹿FSH-α亚基氨基酸序列与其它动物该序列相比,结果显示梅花鹿与山羊的同源性最高,达到99%。它们之间只有1个氨基酸不同。梅花鹿与牛、绵羊、印度水牛的同源性也高达到97%~98%,有3~4个氨基酸不同。从编码FSH-α亚基基因的核苷酸序列来看,在这些比较的动物中,FSH-α亚基基因核苷酸序列是高度保守的。 2.梅花鹿FSH-β亚基基因由390个核苷酸组成,编码129个氨基酸。该序列已提交GenBank被接受,序列号为AY156688。将梅花鹿FSH-β亚基基因核苷酸序列与其它动物相比,结果显示梅花鹿与绵羊、山羊、牛的同源性最高,达到92%~93%,它们之间有24~30个核苷酸不同。梅花鹿与仓鼠、大鼠、褐鼠的核苷酸同源性最低,为81%~82%,有71~74个核苷酸不同。从FSH-β亚基氨基酸序列来看,梅花鹿与绵羊、山羊、牛的同源性最高,达到92%~93%,它们之间有9~10个氨基酸不同。梅花鹿与朱鹮、鹌鹑的同源性最低,为60%~65%,有45~52个氨基酸不同。 3.重组FSH对促进昆明小鼠卵泡发育有一定效果,可促进次级卵泡向成熟卵泡的发育;对雌性未成年昆明小白鼠卵巢增重效果较明显;对促进小鼠子宫重量的增加有一定效果;重组FSH可提高小鼠血清中E2含量,但不同个体反应不同。
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