目的：本研究拟通过紫外线对大鼠背部局部照射建立慢性皮肤损伤模型，探讨ADSCs(adipose-derived stem cells，ADSCs)移植对慢性紫外线照射皮肤损伤的治疗作用，为临床移植ADSCs治疗皮肤光老化提供实验依据。1、通过人ADSCs的提取、培养及鉴定，了解ADSCs生长、分化情况；2、改良皮肤慢性照射损伤模型的建立方法；3、探讨ADSCs应用于临床治疗皮肤光老化损伤的可行性，为治疗光老化探索新思路。方法：第一部分：以酶消化法从人脂肪组织中提取ADSCs，然后接种于培养皿，使用HG-DMEM培养基传代培养至第三代。利用倒置显微镜观察原代细胞形态；用流式细胞仪对细胞表型进行鉴定；加入不同诱导剂，验证干细胞成骨、成脂分化的能力。第二部分：SD大鼠背部皮肤慢性照射损伤模型的建立：将大鼠背部毛发脱去，每日固定时间进行UV照射，最终致其背部皮肤出现光老化；手术切取大鼠照射部位的皮肤组织，并进行H&E、VVG染色，通过倒置显微镜观察，以确定造模是否成功。第三部分：取第三代处于对数生长期的ADSCs，消化后用PBS重悬调整浓度至1.5×105个/ml。每只大鼠背部标记a, b, c3块区域，以每个区域1ml的剂量，将ADSCs悬液均匀注射至治疗组6只大鼠背部b区及c区皮下组织内。以相同剂量PBS均匀注射至空白及模型组12只大鼠背部b区及c区皮下组织内。治疗每周注射一次，为期四周。治疗结束后，每次手术间隔一周，依次切取a、b、c三区域皮肤组织，固定于福尔马林溶液中。通过对皮肤组织切片进行H&E、VVG染色、SOD酶活性测定、MDA含量测定，探讨ADSCs对于慢性UV照射皮肤损伤的治疗作用。结果：第一部分：ADSCs体外培养一周后，大多数细胞呈梭形、不规则三角形或多边形，生长呈束状或漩涡状。传代后，增殖速度较快，一周左右达到90%融合度，而且其免疫表型与脐带间充质干细胞的表达具有高度一致性。继续培养，ADSCs展现出了良好的成脂、成骨的多向分化能力。成脂诱导在10日左右可达到90%以上分化；成骨诱导在20日左右可达90%以上分化。第二部分：采用大体肉眼观察、组织切片H&E染色镜下观察及VVG染色观察，发现UV照射后，皮肤表皮增厚、胶原变性断裂，炎性细胞浸润，出现明显的皮肤组织照射损伤，确定模型建立成功；从实验中，总结出最佳UV损伤模型建立方法：每天持续照射1.5h，从第三周开始每两周增加10min，共照射8周，总照射时长100h，UVB总剂量为7~8J/cm2。第三部分：ADSCs移植后，大鼠背部皮肤慢性紫外线照射损伤后的真皮层胶原合成增加、真皮厚度增加、表皮厚度减少、炎性细胞浸润得到改善、SOD酶活性增加、MDA过氧化物沉积减少，证明ADSCs的存留对照射后皮肤慢性损伤具有明显治疗作用。结论：第一部分：通过经典的酶消化法成功提取ADSCs，并依照国际标准对其进行鉴定；通过描绘ADSCs生长曲线，对ADSCs生长特点及其形态特征有了更直观的认识。这些结果为后续实验的顺利实施奠定了基础。第二部分：成功改良SD大鼠背部皮肤慢性紫外线照射损伤损伤模型的建立方法，使模型建立更加高效。第三部分：通过注射治疗，ADSCs可以成功存留于皮肤组织，并明显改善紫外线照射对皮肤造成的慢性损伤。