螺杆菌感染与食管癌的生物信息学分析

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目的:探讨螺杆菌的感染是否与人类食管癌的发生发展相关。方法:随机收集食管癌病人的手术切除标本34例,另外从法医系收集正常人食管标本10例作为对照。常规酚-氯仿法提取上述食管组织基因组DNA并进行纯化。采用聚合酶链反应(PCR)扩增螺杆菌16SrDNA,PCR在不同时间和地点重复进行,两次结果一致者为阳性,不一致者重新提取模板扩增。阳性者再扩增幽门螺杆菌的特异基因glmM,从而验证是否为幽门螺杆菌。随机选取2例阳性标本的PCR产物进行分子克隆、测序、序列分析和近缘细菌遗传进化树比较。对阳性标本及正常人对照标本进行针对幽门螺杆菌蛋白的免疫组化染色。结果: 32.3%(11/34)的食管癌组织中发现有螺杆菌16S rRNA基因存在,而10例正常人食管标本均没有发现螺杆菌16S rRNA基因存在。2例阳性标本的PCR产物测序及同源性比较和分析显示,食管癌组织中螺杆菌序列与H.pylori的16S rDNA序列有99%同源性。进化树显示2例食管癌组织中螺杆菌序列与H.pylori的进化距离最近。所有的阳性标本均能扩增出Hp特异基因glmM。免疫组织化学染色显示阳性标本的幽门螺杆菌的蛋白表达主要位于细胞浆和间质,而在正常人对照标本中没有发现特异性着色。结论:人类食管癌组织中检测出螺杆菌16S rRNA基因和Hp特异性基因glmM,食管癌组织存在螺杆菌慢性感染,可能与人类食管癌的发生有关。
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