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目的利用三日龄大鼠建造缺氧性脑损伤模型,模拟早产儿出生时缺氧,检测海马组织胰岛素受体水平,探究短暂缺氧对三日龄大鼠海马内胰岛素受体表达的影响,从神经保护层面出发为临床上治疗早产儿缺氧性脑病提供基础实验依据。方法1建立缺氧性脑损伤模型,将新生鼠置于氮氧混合气体中2h。缺氧期间,观察并记录新生鼠的行为变化。缺氧结束后24h取海马组织进行尼氏染色和透射电镜检测评价缺氧模型。2按上述方法成功建立缺氧模型,并设立对照组,于缺氧后2h、4h、24h三个时间点取材,运用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫荧光染色等技术探究短暂缺氧对β-catenin、NeuroD1、insulin receptor在基因和蛋白层面表达的影响。结果1缺氧模型评价与对照组相比,缺氧组新生鼠:1)行为变化监测:新生大鼠缺氧时出现程度不一的行为改变,例如呼吸加快,全身颤抖抽搐。2)神经元形态改变:神经元数量明显减少,细胞排列较松散,层次减少,染色较浅,核仁模糊。3)超微结构改变:神经元核膜破裂不完整,胞核出现肿胀,线粒体、粗面内质网等细胞器均出现肿胀;神经元突起出现不同程度的水肿。2实时荧光定量PCR与对照组相比,缺氧组新生鼠:1)缺氧后2h,三组目的基因相对表达量无统计学差异。2)缺氧后4h,β-catenin基因相对表达量降低(P<0.01),NeuroD1(P<0.05)和insulin receptor基因相对表达量增高(P<0.05)。3)缺氧后24h,β-catenin和insulin receptor基因相对表达量无统计学差异,但NeuroD1基因相对表达量持续增高(P<0.05)。3蛋白免疫印迹与对照组相比,缺氧组新生鼠:1)缺氧后2h,三组目的蛋白表达量无统计学差异。2)缺氧后4h,active-β-catenin(P<0.05)和NeuroD1(P<0.01)蛋白表达量增高,insulin receptor蛋白表达量无统计学差异。3)缺氧后24h,active-β-catenin(P<0.05)、NeuroD1(P<0.01)和insulin receptor(P<0.05)蛋白表达量均增高。4免疫荧光染色与对照组相比,缺氧组新生鼠:1)缺氧后2h,三组目的蛋白的荧光强度无明显差别;active-β-catenin和NeuroD1蛋白主要分布于胞质中,而insulin receptor蛋白在胞核与胞质内均可见。2)缺氧后4h,active-β-catenin和NeuroD1蛋白荧光强度均增高;active-β-catenin蛋白基本上都分布于胞质中;NeuroD1蛋白在对照组中主要位于胞质内,但是在缺氧组中大量分布于胞核中;insulin receptor蛋白荧光强度无明显差异,但基本上分布于胞质内。3)缺氧后24h,三组目的蛋白荧光强度均增高;active-β-catenin蛋白主要分布于胞质中;NeuroD1和insulin receptor蛋白胞核中含量增高。结论1采用三日龄SD大鼠模拟早产儿,置于混合气体中持续低氧2h,成功建立了新生鼠缺氧性脑损伤模型,为本课题后续实验提供模型基础。2短暂缺氧能刺激active-β-catenin、NeuroD1和insulin receptor的基因和蛋白层面表达。短暂缺氧后insulin receptor蛋白胞核内含量增高,其表达可能受到Wnt/β-catenin/NeuroD1通路的影响。