双歧杆菌(Bifidobacteria)是人和动物肠道内的主要生理菌之一,由于它具有抑制有害菌、免疫赋活、抑癌和营养等多种生物学功效,双歧杆菌已经广泛应用于食品和保健品生产,对它的研究早已成为微生态学界和食品学界的热点,但是现有的生产菌株携带天然质粒的情况却很少见。因此,对生产菌株进行基因水平的改造显得力不从心。如果能够分离到携带天然质粒的双歧杆菌株,通过分子生物学手段对它进行基因工程改造,使双歧杆菌制品增加新的抗感染、抗肿瘤功能,或将它改造成基因治疗的给药系统等,将使双歧杆菌方面的研究和应用升华到一个新的层次。 本研究从健康男性青年粪便中分离到一株携带天然质粒的人两歧双歧杆菌株,在此基础上开展了以下几方面的研究工作: 第一部分 携带天然质粒的双歧杆菌种株分离和鉴定, 1. 在 MRS 和 BLb 培养基的基础上,结合文献进展和实验室条件,研制出了对双歧杆菌有较强选择性的培养基,命名为 ESB(enhanced selective medium for Bifidobacteria)。 2. 用改良的ESB培养基从健康男青年新鲜粪便中分离到一株携带天然质粒(命名为 pBIF10)的人源双歧杆菌,实验室编号 B200304。在 1.0%琼脂糖凝胶上,测得该质粒的相对分子质量约为 10kb。通过对该菌株的形态学观察、糖发酵试验和 16S rDNA 序列分析,证明该菌株为两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum);HPLC 法测得其 G+C mol%为 55.6。 3. 对该菌株申报了国家发明专利(公开号:1513984),目前该菌株保存在中国典型培养物保藏中心(CCTCC),菌株编号 CCTCC M203049。