目的:巨噬细胞浸润到肿瘤组织后,可分化为抗肿瘤的M1型巨噬细胞和促肿瘤的M2型巨噬细胞,鉴于这两型巨噬细胞的功能特点,本文拟通过诱导M2型向M1型巨噬细胞转化的研究,探讨可能用作肿瘤干预的新靶点。人参炔醇是天然存在的聚乙炔醇类化合物,且分布广泛,大量数据表明,人参炔醇对多种肿瘤细胞具有显著的抑制作用,然而,未见关于人参炔醇用于重塑巨噬细胞表型和功能及其抑制乳腺癌细胞的报道。本文将人参炔醇作用于M2型巨噬细胞,检测M2型巨噬细胞表型以及功能的改变并探究机制,观察其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:(1)以不同浓度(0,8,16μg/mL)人参炔醇处理4T1乳腺癌细胞(6,12,24h),采用CCK-8试剂盒检测增殖情况;并用Annexin-V/7AAD试剂盒检测肿瘤细胞凋亡比例;同时运用Western blot技术测定4T1细胞中caspase3,Cleavedcaspase3,Bax,Bcl-2等凋亡相关蛋白表达;以4T1细胞与不同浓度(0,8,16μg/mL)人参炔醇分别置于Transwell的上室和下室培养24h,检测人参炔醇对肿瘤细胞迁移侵袭行为的影响。(2)用4T1细胞培养上清预处理RAW264.7巨噬细胞48h,之后分别给以不同剂量的人参炔醇刺激24h,通过Western blot检测巨噬细胞RAW264.7中Arg-1、iNOS表达;同时运用qRT-PCR法分析Arg-1、iNOS的mRNA表达水平。运用流式细胞术检测巨噬细胞表面抗原提呈相关分子的表达;以qRT-PCR法及ELISA监测巨噬细胞分泌谱变化。(3)将人参炔醇预处理后的RAW264.7细胞与4T1细胞共培养,镜下观察4T1细胞形态,Transwell实验检测RAW264.7细胞对肿瘤细胞迁移侵袭活动的影响。(4)利用qRT-PCR法筛选并验证巨噬细胞中差异表达的LncRNA,比较人参炔醇刺激前后目的LncRNA的表达差异。设计合成小干扰RNA,对RAW264.7细胞进行转染,分析目的LncRNA下调后巨噬细胞功能变化。结果:(1)CCK-8实验结果显示,人参炔醇处理的4T1细胞在6h、12h和24h都表现出增殖抑制,并呈时间和剂量依赖;不同浓度人参炔醇刺激4T1细胞可诱发不同程度的凋亡。Western blot结果显示Bax、Cleaved-caspase3等蛋白表达水平升高,而Bcl-2蛋白表达水平则降低;Transwell迁移、侵袭实验结果显示,人参炔醇浓度越高,对肿瘤细胞迁移、侵袭的抑制作用越明显。(2)Western blot及qRT-PCR结果显示人参炔醇处理组RAW264.7的Arg-1蛋白及mRNA表达水平均明显降低,而iNOS则升高;FCM结果显示,RAW264.7细胞表面CD80,CD86,MHCII类分子表达上调;同时qRT-PCR及ELISA结果表明TNF-α,IL-1β分泌增多,IL-4,IL-8,IL-10分泌减少。(3)Transwell结果表明,经人参炔醇预处理的RAW264.7对4T1的迁移侵袭活动表现出限制作用。(4)qRT-PCR结果显示人参炔醇处理组巨噬细胞表型改变并伴有LncRNA039932表达下降。结论(1)人参炔醇可以直接促进4T1细胞凋亡,限制其迁移侵袭活动。(2)人参炔醇能够改变巨噬细胞表型,影响其功能和细胞因子分泌谱,进而间接抑制4T1细胞的生物学行为。(3)人参炔醇处理下RAW264.7细胞功能改变并伴有LncRNA039932表达下降。