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本研究工作主要包括以下内容:
1.采集不同产地样品,通过理化分析,确定牡丹皮有效成分含量高的主产区,确定实验用药材来源。
2.牡丹皮药材总苷组分的提取。
3.SP-X型树脂纯化分离丹皮总苷的工艺参数考察。
4.牡丹皮总苷组分的纯化。
5.提取、分离牡丹皮中总苷组分的含量测定。
6.牡丹皮提取部位抗缺血性中风的实验研究。
6.1提取物不同剂量对MCAO大鼠体重影响及神经学评价。
6.2提取物不同剂量对MCAO大鼠被动性条件反射的影响。
6.3提取物不同剂量对MCAO大鼠脑梗塞面积的影响。
研究方法:
1.采用乙醇加热回流提取工艺,通过正交实验法考察提取次数、提取时间和溶媒用量及乙醇浓度对提取物及组分的影响,并以牡丹皮总苷中的含量较多的单体成分芍药苷为指标采用高效液相色谱法进行含量测定。优选出最佳提取条件。
2.采用大孔吸附树脂对牡丹皮总苷组分进行纯化分离。通过筛选确定树脂型号,并通过静态吸附试验确定树脂最大吸附容量、动态吸附试验确定树脂实际最大上样量。通过正交试验考察上样浓度、树脂型号、洗脱溶媒的醇浓度、洗脱溶媒体积对总苷组分纯化的影响,以高效液相色谱法及分光光度法对工艺、纯化工艺中芍药苷含量进行测定,通过实验结果,对上述工艺进行优选。
3.应用开颅法阻断大脑中动脉(MCA)建立大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO),研究所得牡丹皮总苷组分对大鼠脑缺血损伤引起的体重减轻、神经功能损伤及脑组织损伤的保护作用。
研究结果:
1.本课题就所掌握药材样品情况试验筛选,分别以丹皮酚和芍药苷为指标,对收集到的牡丹皮药材样品进行含量测定,根据实验结果,选用安徽铜陵药材基地产牡丹皮作为实验用药材。
2.牡丹皮药材乙醇提取工艺为牡丹皮加5倍体积的75%乙醇加热回流提取3次,每次1小时。
3.经正交试验筛选,选用日本三菱SP-1型大孔吸附树脂作为牡丹皮总苷类成分纯化材料。
4.牡丹皮总苷成分的提取工艺如下页流程所示。
5.建立分光光度法对所得牡丹皮总苷组分中总苷含量进行检测。采用所建立方法,对所得五批牡丹皮总苷提取物(20050329、20050620、20050830、20060110,20060330)进行含量测定。表明其中总苷含量以芍药苷计为65%-75%。
6.应用开颅法阻断大脑中动脉(MCA)建立大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO),研究表丹皮伤状况,缩小脑梗塞体积、降低脑缺血大鼠脑水肿。