肺腺癌多药耐药细胞系A549/ADM的建立及阿奇霉素耐药逆转研究

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目的:用阿霉素体外诱导的方法建立多药耐药细胞系A549/ADM。研究阿奇霉素对A549/ADM的耐药逆转作用。方法 采用阿霉素诱导A549使其耐药。首先在培养液中使用低浓度阿霉素持续诱导,再逐渐、间歇增加阿霉素浓度。用流式细胞仪(FCM)测定A549和A549/ADM的P-GP和MRP的表达。用MTT法分别检测四种药物对A549、A549/ADM、使用阿奇霉素(AZM)处理后的A549/ADM的半数抑制浓度(IC50)。MTT法检测不同浓度阿奇霉素对A549/ADM的抑制率。用FCM检测A549、A549/ADM及使用阿奇霉素处理的A549/ADM细胞内ADM荧光强度。结果A549的P-GP和MRP的表达分别为2.3%和2.5%,而A549/ADM的P-GP和MRP的表达分别为33%和46.3%。A549/ADM对阿霉素的耐药指数为A549的17.80倍,对VCR、DDP、MTX均有不同程度的耐药。使用5μg/ml阿奇霉素处理后,A549/ADM对ADM的敏感性为原来的2.81倍,对DDP、VCR、MIX的敏感度分别为原来的1.86、3.78、3.86倍。加入10μg/ml的阿奇霉素后,A549/ADM对上述药物的敏感程度提高更明显。同样浓度的阿霉素作用相同时间后,A549、A549/ADM和使用阿奇霉素处理后的A549/ADM的荧光强度分别为121.4、51.2、96。结论 利用阿霉素在体外采用低浓度梯度持续诱导,加以高浓度间歇诱导的方法,可以建立多药耐药细胞系。耐药细胞系A549/ADM表现对多种常用化疗药物不同程度的耐药。P-GP、MRP的高表达在MDR的发生中可能起着重要作用。阿奇霉素可能通过增加药物在细胞内的聚集而逆转A549/ADM的多药耐药。其逆转效果与剂量相关。
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