【摘 要】
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目的:1.建立尿液中5羟（基）-β吲哚乙醇葡萄糖苷酸（5-hydroxytryptophol glucuronide,GTOL）和5羟（基）吲哚-3-乙酸（5-hydroxyindole-3-aceticacid,5-HIAA）的高效液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测方法。2.研究5-羟色胺代谢物在尿液中的代谢动力学规律,为判定饮酒案件提供法医学依据。方法:1.分析方法:乙醇的检测:取10
【基金项目】
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“体液斑中毒物等外源成分检验与特刻画研究”国家重点研究计划（2017YFC0803504）； “吸毒定性和吸毒时间认定关键技术研究”（编号:2018YFC0807403）国家重点研发项目；
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目的:1.建立尿液中5羟（基）-β吲哚乙醇葡萄糖苷酸（5-hydroxytryptophol glucuronide,GTOL）和5羟（基）吲哚-3-乙酸（5-hydroxyindole-3-aceticacid,5-HIAA）的高效液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测方法。2.研究5-羟色胺代谢物在尿液中的代谢动力学规律,为判定饮酒案件提供法医学依据。方法:1.分析方法:乙醇的检测:取100μL待测尿液于顶空瓶中,加入叔丁醇（4mg/100m L）500μL,加盖密封,混匀后进样,HS-GC分析,标准曲线法计算乙醇含量。GTOL和5-HIAA的检测:取尿液100μL于1.5m L离心管中,依次加入10μL内标工作液（D4-GTOL、D2-5HIAA,250ng/m L）,然后加入500μL乙腈（1%甲酸）,涡旋2分钟。将混合后的样本加至过滤小柱,氮气加正压2-5Psi,控制流速在3-5秒/滴,干燥5分钟。氮气流下（20-28Psi）进行吹干,用200μL流动相复溶,进样,使用LC-MS/MS分析,标准曲线法计算GTOL和5-HIAA含量。2.样本收集饮酒者尿液中GTOL和5-HIAA代谢动力学研究:12名20～30岁健康男性受试前确认一周内无饮酒史,无酒精过敏及其他疾病。经过一夜的禁食,在早上8点伴食饮酒（0.975m L/Kg）,然后在饮酒后0.5h、1h、1.5h、2h、3h、4h、5h、7h、9h、12h、15h、24h、48h、72h收集尿液。测定每次收集尿液的总容量,并将20m L等量尿液保存在-20℃下,待检。饮酒者尿液中GTOL和5-HIAA比值研究:收集乙醇阳性者尿液28例,阴性者尿液1例,收集后放置于-20℃待检。结果:1.GTOL和5-HIAA的检测方法:GTOL在0.025μg/m L-2μg/m L范围内呈线性关系,R2大于0.999,检测限和定量下限分别为0.01μg/m L和0.02μg/m L。5-HIAA在0.1μg/m L-50μg/m L范围内呈线性关系,R2大于0.99,检测限和定量下限分别为0.02μg/m L和0.05μg/m L。GTOL和5-HIAA的日内和日间精密度均小于15%,准确度分别在90.52%～111.04%和96.81%～112.30%,稳定性变化率在﹣11.96%～3.71%。2.12名受试者未饮酒时尿液中GTOL和5-HIAA比值是0.74±0.95pmol/nmol,在饮酒0.5小时后均大于15pmol/nmol,在3～8小时降低至15pmol/nmol以下。3.25例乙醇阳性尿液样本GTOL和5-HIAA比值均大于15pmol/nmol,3例乙醇阳性尿样本和1例乙醇阴性尿液样本GTOL和5-HIAA比值小于15pmol/nmol,乙醇浓度与GTOL/5-HIAA之间呈显著正相关（r=0.963）。结论:本研究建立的尿液中GTOL和5-HIAA定性定量分析方法准确、灵敏,可以应用于饮酒后GTOL和5-HIAA定量分析;通过对12名受试者单次饮酒后尿液中GTOL和5-HIAA代谢动力学研究,GTOL和5-HIAA比值检测时限为饮酒后0.5～9h,比乙醇的检测时限长,在推断饮酒时间方面比乙醇更有优势;通过对28例乙醇阳性样本尿液GTOL和5-HIAA比值测定,证实了用二者比值大于15pmol/nmol来判定近期饮酒适用于中国人群;通过Pearson相关性分析研究,尿液中的乙醇含量与GTOL/5-HIAA有显著正相关。以上研究证明GTOL和5-HIAA可以作为一种有力的辅助手段,为司法鉴定法工作中饮酒判定提供科学依据。
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