负载冻融抗原的DC诱导特异性CTL杀伤U937细胞的实验研究

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树突状细胞(DC)是体内功能最强的专职抗原呈递细胞(APC),因成熟时伸出许多树突样或伪足样突起而得名。与其他抗原呈递细胞不同,DC最大的特点是能够显著刺激初始型T细胞增殖,促进T辅助细胞和细胞毒T淋巴细胞的生成,也能促进B细胞发育、分化及激活。而吞噬细胞、B细胞仅能刺激已分化的或记忆性T细胞,因此DC是机体免疫反应的初始者,在免疫应答的诱导中具有独特的地位。其在肿瘤免疫治疗中的作用越来越受到重视。目前用DC进行肿瘤特异性主动免疫治疗主要有:1)应用肿瘤相关抗原(肽)体外致敏DC;2)编码TAA或细胞因子的基因转导DC;3)将瘤细胞与DC在体外融合,形成DC-瘤细胞嵌合体,回输体内;4)直接应用DC。 参考国内外的相关文献,我们探讨通过树突状细胞(DC)负载白血病细胞株U937冻融抗原,体外诱导细胞毒性T细胞(CTL),使其对U937细胞产生特异性杀伤作用。我们应用基因重组人白介素4(rhIL-4),基因重组人粒/单细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)联合培养体系自正常人骨髓单个核细胞诱导产生DC,选取单核细胞性白血病细胞株U937制备冻融抗原,使其负载U937冻融抗原,致敏T淋巴细胞,产生CTL。观察负载U937冻融抗原后DC对所激发的T淋巴细胞表型及功能的影响及CTL对U937细胞特异性杀伤活性。通过实验我们发现,负载U937冻融抗原后DC的CD1a表达率为(13.19±0.48)%,较培养前(0.45±0.19)%明显增高(P<0.01),CD86、CD11c、HLA-DR表达也较培养前明显增高(P<0.01),而CD83、CD14与培养前相比无明显变化(P>0.05)。且负载U937冻融抗原的DC诱导的CTL中CD3~+CD8~+T细胞比例(62.54±2.51)%较诱导前(32.78±3.21)%明显增高(P<0.01),而U937冻融抗原负载DC诱导CTL对U937细胞及K562细胞的杀伤率分别为66.96+6.21%和9.81±2.13%,两者差异有极显著性意义(P<0.001),负载U937冻融抗原DC诱导CTL组、未负载U937冻融抗原DC诱导CTL组、经IL-2培养的T细胞组、未加IL-2培养的T细胞组杀伤U937细胞杀伤率分别为66.96+6.21%、32.68±3.69%、10.41±4.22%、8.43±5.47%,负载U937冻融抗原DC诱导CTL与后三者杀伤率差异有极显著性意义(P<0.001)。结论:经rhGM-CSF,rhIL-4培养产生的DC为CD14~-CD1a~+的DC,能诱导CTL产负载冻融抗原的DC诱导特异性C几杀伤U937细胞的实验研究摘要生明显的特异性杀伤作用,另外,负载u937冻融抗原DC诱导的CTL中CD3十CDS干T细胞比例明显增高,提示CDs+T细胞在抗肿瘤免疫中具有极其重要的作用。
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