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目的:研究经前期综合征(Premenstrual syndrome,PMS)肝气郁证大鼠模型在接受期(Receptive phases/R)和非接受期(Non-Receptive phases/NR)关键脑区中γ-氨基丁酸转氨酶(GABA transaminase,GABA-T)、谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD)、γ-氨基丁酸转运体(GABA transporter,GAT-1)变化和调肝方药舒郁胶囊对其干预作用,探讨舒郁胶囊治疗PMS肝气郁证的作用机制。方法:1.以阴道涂片法筛选动情周期规律的雌性大鼠,据体质量、旷场总路程将大鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+舒郁胶囊组(SY组)、模型+氟西汀组(FXT组)。以改进优化的慢性束缚应激法制备PMS肝气郁证大鼠模型,造模时间为两个动情周期。造模及药物干预结束后,采集大鼠体质量,旷场总路程和强迫游泳悬浮不动时间等行为学指标,分别于接受期和非接受期采集外周血以及中枢关键脑区海马、额叶、顶区、下丘脑,存于-70℃待检测。2.ELISA法分别检测接受期、非接受期各组大鼠外周血清中谷氨酸(glutamate,Glu)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量。3.Berthelot法分别检测接受期、非接受期各组大鼠海马、额叶、顶区、下丘脑中GAD、GABA-T的活性。4.实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测接受期、非接受期各组大鼠海马、额叶、顶区、下丘脑中GABA-T、GAD、GAT-1的mRNA及蛋白表达情况。结果:1、各组大鼠行为学评价:(1)体质量增加量:束缚应激造模结束后,与对照组正常大鼠相比,模型组大鼠体质量增加量显著性降低(P<0.05);与模型组大鼠相比,给予药物干预后,SY组和FXT组大鼠体质量增加量显著上升(P<0.05)。(2)旷场总路程:与对照组正常大鼠相比,模型组大鼠旷场总路程显著性降低(P<0.05);给予药物干预后,与模型组相比,SY组和FXT组大鼠旷场总路程显著性升高(P<0.05)。(3)悬浮不动时间:与对照组正常大鼠相比,模型组大鼠悬浮不动时间显著性升高(P<0.05),与模型组相比,给予药物干预后,SY组和FXT组悬浮不动时间降低显著(P<0.05)。2、接受期和非接受期各组大鼠血清Glu、GABA浓度比较:在非接受期下,与对照组正常大鼠相比,模型组大鼠的Glu浓度显著升高(P<0.05),与模型组相比,FXT组和SY组的Glu浓度显著降低(P<0.05);与正常对照相比,模型组大鼠的GABA浓度显著降低(P<0.05),与模型组相比,FXT组和SY组的GABA浓度显著升高(P<0.05)。在接受期下,各组大鼠的Glu和GABA含量都无显著性差异(P>0.05)。3、接受期和非接受期各组大鼠GABA-T,GAD酶的活性变化情况:接受期和非接受期各组大鼠海马、额叶、顶区、下丘脑的GABA-T,GAD酶的活性均无显著性差异(P>0.05)。4、接受期和非接受期各组大鼠海马、额叶、顶区、下丘脑中的GABA-T、GAD、GAT-1的m RNA及蛋白表达情况:?mRNA表达情况:在接受期下,各组大鼠海马、额叶、顶区、下丘脑中的GABA-T、GAD、GAT-1的mRNA表达均无显著性差异(P>0.05)。在非接受期下,与正常对照组相比,模型组海马、额叶、下丘脑的GABA-T、GAT-1的mRNA表达显著下降(P<0.05),顶区的GABA-T、GAT-1表达量上升(P<0.05);海马、额叶、顶区、下丘脑中的GAD65、GAD67的mRNA表达显著升高(P<0.05);与模型组大鼠相比,FXT组、SY组的海马、额叶、下丘脑中的GABA-T、GAT-1的mRNA表达显著升高(P<0.05),顶区GABA-T、GAT-1的m RNA表达下降;海马、额叶、顶区、下丘脑中的GAD65、GAD67的mRNA表达显著降低(P<0.05)。?蛋白表达情况:在接受期下,各组大鼠海马、额叶、顶区、下丘脑中的GABA-T、GAD、GAT-1的蛋白表达均无显著性差异(P>0.05)。在非接受期下,与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠海马、额叶、下丘脑的GABA-T、GAT-1蛋白含量显著性降低(P<0.05),顶区的GABA-T、GAT-1蛋白含量显著性升高(P<0.05),海马、额叶、顶区、下丘脑中的GAD65、GAD67蛋白含量显著性升高(P<0.05);与模型组大鼠相比,FXT组、SY组大鼠海马、额叶、下丘脑的GABA-T、GAT-1蛋白含量显著性升高(P<0.05),顶区GABA-T、GAT-1蛋白含量降低,而海马、额叶、顶区、下丘脑中的GAD65蛋白含量显著性降低(P<0.05),海马、额叶、下丘脑的GAD67含量显著下降(P<0.05)。结论:优化改进的慢性束缚应激法可成功复制出PMS肝气郁证模型;该病证发生与大鼠脑中枢Glu-GABA代谢通路中的关键酶:GABA-T、GAD、GAT-1的mRNA及蛋白表达异常有关;上述关键酶的异常会造成Glu、GABA含量异常,导致Glu/GABA失衡,从而诱发PMS肝气郁证发生;中药复方舒郁胶囊可纠正模型大鼠行为学异常及中枢关键脑区上述关键酶mRNA及蛋白表达异常,促进Glu/GABA平衡恢复。综上,本研究初步从Glu-GABA代谢通路揭示PMS肝气郁证发病机制,同时为调肝方药治疗PMS肝气郁证提供新的靶点。