论文部分内容阅读
目的：将LTB-PorB核酸疫苗和重组蛋白疫苗鼻饲免疫BALB/c小鼠,分别分析其免疫活性,探讨粘膜佐剂LTB能否辅佐PorB诱导更有效的特异性粘膜免疫,为经粘膜途径感染病原体的疫苗研制进行有益探索；采用LTB-PorB核酸疫苗与重组蛋白疫苗联合(核酸初免-蛋白加强免疫)鼻饲免疫雌性BALB/c小鼠,探讨其能否增强特异性体液免疫和细胞免疫应答水平,为研制高效抗淋病疫苗提供实验依据。方法：1.对本课题组保存的真核表达重组质粒pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)/porB和pcDNA3.1(-)/ltB-porB进行鉴定后,大量制备并纯化；鼻饲免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平。2.将本课题组保存的原核表达重组质粒pET-30a/ltB、pET-30a/porB和pET-30a/ltB-porB在大肠杆菌BL21中诱导表达重组蛋白；鼻饲途径免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平。3.大量制备LTB-PorB核酸疫苗及重组蛋白疫苗；通过鼻饲途径将核酸疫苗和重组蛋白疫苗采用核酸初免-蛋白加强(DNA prime-protein boost)联合免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫应答水平。结果：1. LTB-PorB核酸疫苗(pcDNA3.1(-)/ltB-porB)免疫组小鼠生殖道黏膜产生的PorB特异性sIgA和血清IgG水平随免疫时间呈上升趋势,第8 w sIgA A450值达0.4705±0.088,明显高于对照组(P<0.01),效价达1：320；第8 w IgG A450值为0.528±0.106,明显高于pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)和PBS对照组(P<0.01),效价达1：1280,但与pcDNA3.1(-)/porB对照组(A450：0.511±0.094)无显著性差异(P>0.05)。pcDNA3.1(-)/ltB-porB组脾淋巴细胞刺激指数和脾淋巴细胞诱生的IFN-γ、IL-4水平均明显高于pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)和PBS对照组(P<0.05)。2. LTB-PorB重组蛋白疫苗免疫组小鼠生殖道黏膜产生的PorB特异性sIgA水平随免疫时间呈上升趋势,第6 w A450值达0.663±0.095,明显高于对照组(P<0.01),效价达1：1280；血清中PorB特异性IgG水平在第4 w达最高,A450值为0.598±0.062,明显高于LTB和蛋白溶解液(Solution Buffer)对照组(P<0.01),效价达1：5120,但与PorB对照组(A450：0.570±0.060)无显著性差异(P>0.05)。LTB-PorB组脾淋巴细胞诱生的IL-4水平和脾淋巴细胞刺激指数明显高于LTB和Solution Buffer对照组(P<0.05),但脾淋巴细胞诱生的IFN-γ水平与对照组无显著性差异(P>0.05)。3. LTB-PorB核酸疫苗和重组蛋白疫苗联合免疫组免疫后第8 w,小鼠生殖道sIgA(A450：1.083±0.179,效价达1：2560)、血清IgG(A450：1.023±0.116,效价达1：20480)、脾淋巴细胞诱生的IL-4(357.58±34.44pg/ml)和IFN-γ(261.85±29.92pg/ml)水平均明显高于对照组(P<0.01),小鼠脾淋巴细胞刺激指数(SI：2.12±0.29)较对照组显著增高(P<0.05)；核酸疫苗组、蛋白疫苗组和联合免疫组血清IgG亚类IgG2a/IgGl比值分别为1.678、0.455和0.693。结论：1. LTB-PorB核酸疫苗和重组蛋白疫苗通过鼻饲免疫雌性BALB/c小鼠,能诱生较高水平的特异性细胞免疫和体液免疫,尤其是粘膜免疫,表明粘膜佐剂LTB可有效提高PorB诱导的特异性粘膜免疫应答水平。2. LTB-PorB核酸疫苗和重组蛋白疫苗联合免疫诱导的特异性细胞免疫和体液免疫应答水平明显优于单独的核酸疫苗或重组蛋白疫苗,联合免疫以诱导Th2倾向性体液免疫应答为主。