猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)常会引起母猪的流产、不孕、产死胎、木乃伊胎等症状,是导致妊娠母猪繁殖障碍的主要病原之一。该病毒还可引起新生仔猪的腹泻和皮炎等症状,给世界养猪业带来了巨大的经济损失。PPV常与呼吸道病毒混合感染而加重其感染危害。因此,加强对于PPV的检测和预防十分重要。2014年在中国首次发现PPV6型。而针对该型的研究内容较少。本研究针对从安徽地区获得的一株PPV6阳性样品,对其进行全基因组克隆及序列分析,并对得到的的NS1和Cap基因序列进行生物信息学分析。最后建立了PPV6 SYBR Green I荧光定量PCR的快速检测方法。具体研究内容如下:设计10对特异性引物,将PCR检测呈PPV6阳性的样本进行全基因组序列扩增,命名为PPV6 AH株。将PPV6 AH株与其他PPV6参考毒株进行序列分析。结果显示,PPV6 AH株与参考株序列核苷酸同源性达到97.1%～99.5%。遗传进化树显示,AH株与BJ、BJ2、SC及JS株有着共同的进化起源。NS1基因和Cap基因分别存在3个和4个核苷酸位点突变;Cap蛋白氨基酸在第402和404位点发生突变。本研究首次报导安徽省的猪群中存在PPV6携带感染的现象,该研究结果为安徽地区PPV6的分子遗传进化特征提供了一定的参考。使用生物信息学软件对PPV6 AH株的NS1和Cap蛋白序列进行分析。结果显示,NS1蛋白属于疏水不稳定蛋白,有5个跨膜结构域,α螺旋占主体,存在98潜在的磷酸化位点,7个B细胞抗原表位,2个CTL表位和10个Th表位;Cap蛋白是亲水不稳定蛋白,无规则螺旋占主体,存在233潜在磷酸化位点,5个B细胞抗原表位,2个CTL表位和1个Th表位。本试验成功预测了PPV6 AH株NS1和Cap蛋白的基本生物学特性,为揭示PPV6的致病机制以及后续表位疫苗研发奠定了一定的基础。构建的重组质粒pMD19T-PPV6-Cap作为阳性标准质粒。以10倍稀释的重组质粒为模板,进行SYBR Green I荧光定量PCR扩增,通过优化反应条件,进行敏感性、特异性和重复性等验证。结果表明,该方法在4.78×10~8～4.78×10~1copies/μL范围内具有良好的线性关系,病毒最低检出量为47.8 copies,敏感性比常规PCR电泳检测高出1000倍;该方法与PPV7、PCV2等病原未发生交叉反应;组内组间重复性实验的变异系数均小于1%,具有良好的重复性;临床样品检测结果显示所建立的荧光定量PCR阳性检出率比传统PCR检测率高7.78%。本试验成功建立的PPV6 SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,可用于临床上对于PPV6感染的快速检测。