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增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)是一种严重的致盲性眼病，是孔源性视网膜脱离手术失败最常见的原因。研究证实：PVR是视网膜色素上皮细胞和神经胶质细胞等移行至玻璃体、增生形成收缩膜造成牵拉性视网膜脱离的病变。但迄今为止PVR的发病、启动机制尚未完全明了。诸多研究成果显示，免疫系统在PVR的形成过程中可能发挥了重要作用，但是具体机制尚不明确，许多研究结果有时相互矛盾，很难从中判定PVR形成过程中出现的免疫学变化是PVR产生的原因还是结果。因此，非常有必要在体内实验中利用动物模型进一步研究免疫系统在PVR发生中的作用。
建立良好的实验动物模型是研究的关键。蛋白水解酶Dispase玻璃体腔注射能够破坏正常的视网膜组织，引起各种内源性细胞及细胞因子释放、移行从而诱导PVR的发生，该方法目前被广泛应用于建立PVR的动物模型。Rag-1基因敲除小鼠(Rag-1 gene knock out mice，KO Mice)体内不能产生成熟的T淋巴细胞和B淋巴细胞，广泛用于免疫系统功能的研究。本研究应用Dispase玻璃体腔注射的方法，在Rag-1基因敲除小鼠和野生型小鼠(wild type mice，WT Mice)体内建立PVR模型，探讨不同免疫系统的两种小鼠的PVR发生情况，阐明免疫系统在PVR的发病过程中所发挥的作用。
目的：应用KO和WT小鼠，通过Dispase玻璃体腔注射的方法建立PVR模型，通过比较诱导过程中特异性免疫反应阶段(1-8 week)和天然免疫反应阶段(Ohr—7day)两种小鼠的差异，阐明免疫系统在PVR的发病过程中所发挥的作用。
方法：
1、KO小鼠的鉴定
(l) Rag-1基因鉴定；
(2)小鼠体内成熟T细胞(CD4+、CD8+)、B细胞(B220+)的鉴定。
2、特异性免疫反应阶段(1-8周)
实验分组：45只KO小鼠随机分为Dispase玻璃体腔注射的模型组(25只)和生理盐水注射的对照组(20只)；45只WT小鼠随机分为Dispase玻璃体腔注射的模型组(25只)和生理盐水注射的对照组(20只)；重复2次独立实验。玻璃体腔注射后1W、2W、4W、6W和8W，手术显微镜观察散瞳后小鼠眼部情况，统计PVR发生率；视网膜电图(Electroretinograms，ERG)检测模型眼视网膜功能改变；取小鼠模型眼OCT(Optimal Cutting Temperature)包埋制冰冻切片，苏木素—伊红染色(Hematoxylin and Erosin，HE)观察视网膜形态学改变，免疫荧光染色证实PVR增殖膜的细胞成分；酶联免疫斑点技术(Enzyme—linked Immunospot Assay，ELISPOT)及胞内因子染色检测小鼠脾脏单个核细胞分泌的INF—γ、IL—2水平。
3、天然免疫反应阶段(0-7天)
实验分组：40只KO小鼠随机分为Dispase玻璃体腔注射的模型组(24只)和生理盐水注射的对照组(16只)；40只WT小鼠随机分为Dispase玻璃体腔注射的模型组(24只)和生理盐水注射的对照组(16只)；重复2次独立实验。璃体腔注射后0hr、4hr、8hr、12hr、24hr、48hr、5天和7天，手术显微镜观察散瞳后小鼠眼部情况；取小鼠模型眼OCT包埋制冰冻切片，HE染色、免疫荧光染色观察视网膜形态学改变及炎性细胞浸润情况。
结果：
1、KO小鼠未发现Rag-1基因PCR扩增产物(430bp)；KO小鼠的脾脏较同周龄WT小鼠体积小，含有极少量成熟T细胞、B细胞；
2、建模后1W、2W、4W、6W和8W观察KO、WT小鼠实验组模型眼可见虹膜前/后粘连、晶体混浊、玻璃体积血及牵拉性视网膜脱离改变；对照组模型眼早期(1W、2W)可见部分玻璃体积血，晚期眼部无异常改变；KO、WT小鼠的PVR发生率在观察的5个时间点均无统计学差异，建模后2W始发生PVR，8W达高峰：KO组66.67％，WT组75％(P>0.05)；模型眼组织学切片HE染色：实验组模型眼视网膜结构紊乱，玻璃体腔增殖膜形成并牵拉视网膜脱离、神经上皮层与RPE层间可见浆液性液体，晶体结构紊乱；免疫荧光染色：PVR模型眼的玻璃体腔增殖膜成分由GFAP+的胶质细胞GS+的mūller细胞、a-SMA+的纤维细胞和RPE-65+视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium，RPE)组成。对照组眼组织切片未见明显视网膜、晶体形态学改变。KO、WT小鼠PVR模型眼ERG检测a、b波下降幅度无统计学差异，a波(KO14.40±6.83/uV，WT7.75±4.40/uV)、b波(KO34.13±15.28/uV，WT25.79±18.28/uV)；ELISPOT及胞内因子染色的结果显示在Dispase诱导的小鼠PVR模型中没有自身抗原特异性T细胞反应。
3、建模早期(0hr、4hr、8hr、12hr、24hr、48hr、5day和7day)观察KO、WT小鼠实验组模型眼可见前房积血、虹膜粘连、玻璃体积血等改变；对照组模型眼玻璃体积血程度较实验组轻，7天后观察已基本恢复正常，KO、WT小鼠眼部改变无显著差异；实验组模型眼组织学切片HE染色：前房角和玻璃体腔发现中性粒细胞炎性浸润，48hr达到高峰；视网膜组织学结构紊乱，以出血、炎性渗出改变为主。对照组模型眼组织切片视网膜形态学较完整，有少量出血、渗出改变，未见炎性细胞浸润。免疫荧光染色均未发CD3+的T细胞、F4/80+的巨噬细胞和CD56+的自然杀伤细胞(natural killer，NK)参与早期炎症浸润。KO、WT小鼠模型眼组织切片的病理学改变无显著差异。
结论：T细胞介导的特异性免疫应答没有在Dispase诱导的小鼠PVR模型发挥作用，是天然免疫反应参与了PVR的发生。