吡虫啉是全球使用最为广泛的杀虫剂,在环境及食物中时有残留。已有研究关注其残留对人体健康的影响,但有关吡虫啉暴露对过敏性疾病如IgE介导的食物过敏的影响尚不清楚。此外,TLR2介导肥大细胞活化对致病原产生的免疫应答发挥重要作用。研究表明吡虫啉可以抑制机体的免疫应答且可能导致感染性疾病的出现,但目前缺乏吡虫啉暴露对TLR2介导肥大细胞活化的实验数据支持。此外,人体可能同时暴露于多种杀虫剂,但有关多种或两种杀虫剂,如硫丹和吡虫啉对IgE介导的I型超敏反应的联合作用缺乏依据。本论文以杀虫剂吡虫啉为研究对象,建立IgE介导的肥大细胞活化模型,尤其是牛奶β-乳球蛋白通过IgE介导的肥大细胞活化,通过检测与过敏相关的过敏因子等变化,为揭示吡虫啉对IgE介导的肥大细胞脱颗粒的影响及机制提供理论依据;另一方面,本论文研究了吡虫啉对TLR2介导的肥大细胞脱颗粒的影响,为解释吡虫啉通过影响TLR2介导的肥大细胞活化从而影响宿主的免疫应答的可能性提供实验数据支持;最后,本论文还研究了吡虫啉和硫丹联合暴露对IgE介导的肥大细胞脱颗粒的影响,为评价多种杀虫剂对过敏性疾病,如食物中多种杀虫剂的残留对食物过敏的影响提供了示范。研究的主要方法、结果及结论如下。1.建立了IgE介导的体内外肥大细胞活化模型,用吡虫啉处理经IgE激活的肥大细胞和被动皮肤过敏反应的小鼠,检测与过敏相关的过敏因子β-氨基己糖苷酶和组胺、LTC4、IL-6和TNF-α、肥大细胞钙离子内流及小鼠皮肤渗出等的变化。结果表明,10^-3-10^-10 M吡虫啉能抑制IgE介导的大鼠RBL-2H3细胞的组胺、β-hex、LTC4、钙离子内流及IgE介导的小鼠PCA,且其效应呈一定的剂量依赖关系。该研究率先发现吡虫啉能抑制IgE介导的大鼠肥大细胞脱颗粒。2.在以上研究结果基础上,进一步用α7 nAchR拮抗剂和吡虫啉前后处理经IgE激活的肥大细胞和被动皮肤过敏反应的小鼠,检测与过敏相关的过敏因子β-氨基己糖苷酶和组胺、LTC4、IL-6和TNF-α、FcεRI通路中钙离子内流、相关磷酸化抗体p-PLC-γ、p-NF-κB表达及小鼠皮肤渗出等的变化。结果表明,10^-3α7-nAChRs拮抗剂MLA预先处理大鼠RBL-2H3能明显减轻同等浓度的吡虫啉对IgE介导的大鼠RBL-2H3肥大细胞的组胺、β-hex、LTC4、IL-6、TNF-α、钙离子内流、PLC-γ与NF-κB蛋白的磷酸化表达及IgE介导的小鼠PCA的抑制作用。由此提示,α7-nAChRs参与了吡虫啉对体内外IgE介导的肥大细胞脱颗粒的抑制作用。3.建立了TLR2介导的体内外肥大细胞活化模型,用吡虫啉处理经TLR2激活的肥大细胞和被动皮肤过敏反应的小鼠,检测β-氨基己糖苷酶和组胺、LTC4、IL-6和TNF-α、FcεRI通路中钙离子内流、相关磷酸化抗体p-P-PLC-γ、p-NF-κB表达、小鼠皮肤渗出、皮肤炎症细胞浸润等。研究结果表明,10^-3-10^-5M吡虫啉能明显抑制TLR2介导的RBL-2H3细胞活化时前炎症因子TNF-α和IL-6的产生及炎症细胞的浸润,但对其他过敏物质如组胺、β-hex和LTC4的释放、过敏症状及血管渗出无显著影响;10^-3-10^-4 M吡虫啉能明显抑制TLR2介导的小鼠PSA中TNF-α和IL-6的产量及炎症细胞（中性粒细胞）的浸润,但对过敏症状及血管渗出无显著影响。该研究结果提示,吡虫啉可以抑制TLR2介导的肥大细胞后期活化。4.用吡虫啉和硫丹共同处理经IgE激活的肥大细胞和被动系统过敏反应（PSA）的小鼠,检测β-氨基己糖苷酶、组胺、LTC4、IL-6、胞内钙离子内流、p-NF-κB表达、小鼠皮肤渗出及小鼠PSA模型中血清组胺、LTC4和TNF-?产量等的变化。研究结果表明,10^-4-10^-55 M等摩尔浓度的吡虫啉和硫丹混合物能抑制IgE介导的鼠骨髓来源肥大细胞BBMCs活化时组胺、β-hex、LTC4、IL-6、钙离子内流、NF-κB蛋白磷酸化表达,且10^-4等摩尔混合物能抑制IgE介导的小鼠PSA的血管渗出及血小鼠清中组胺、LTC4和TNF-?产量,但是联合暴露的抑制作用与吡虫啉的单独抑制作用相似。研究结果提示,等量高浓度吡虫啉和硫丹混合物能抑制IgE介导的肥大细胞脱颗粒,且吡虫啉发挥了主导作用。5本论文研究主要阐明了吡虫啉对IgE和TLR2介导的肥大细胞脱颗粒的抑制作用及机制,为评价吡虫啉对以肥大细胞活化为基础的过敏性疾病如食物过敏和宿主防御免疫的影响提供了科学依据,进而为剖析环境因素尤其是食物农药残留对以肥大细胞活化为基础的疾病的影响提供了更丰富的理论指导。