球毛壳菌chi及glu基因表达和特性研究

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球毛壳菌(Chaetomium globosum)是一种重要的生物防治真菌,在生物防治过程中产生大量的细胞壁降解酶类,其中包括几丁质酶和葡聚糖酶。本研究以球毛壳菌(C. globosum)在生物防治过程中产生的几丁质酶基因(chi46)和β-1,3-外切葡聚糖酶基因(glu)为研究对象,分别在转录水平和蛋白水平对其表达进行研究。以6种病原菌细胞壁为碳源,运用实时荧光定量PCR技术检测球毛壳菌(C. globosum)chi46和glu在不同诱导时间及其不同诱导物下的表达量的动态变化。结果表明,chi46基因除在杨树烂皮病菌(Valsa sordida)细胞壁的诱导下始终为下调表达外,在立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)、叶枯病菌(Septoria tritici)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)细胞壁诱导下均表现了上调表达,分别在第6 d、6 d、6 d、4 d、2 d时表达量达到高峰,表达量分别提高14.22倍、2.16倍、27.67倍、3.92倍、306.55倍,而后表达量逐渐下降。glu并未产生上调表达的应答反应,而主要表现为诱导初期的下调表达。以6种病原菌细胞壁和5种几丁质衍生物为碳源,诱导球毛壳菌(C. globosum),采用改良的Schales法连续10 d测定发酵液中几丁质酶活性。结果表明,上述11种诱导物均可诱导球毛壳菌(C. globosum)几丁质酶类的产生,其中细胞壁诱导物中以核盘菌(S. sclerotiorum)细胞壁为诱导物产生的酶活性最高,为7.1U;几丁质衍生物中以壳聚糖诱导产生的酶活性最高,为10.2 U;病原菌细胞壁为诱导物产几丁质酶的效果优于几丁质衍生物。以6种病原菌细胞壁为碳源,对球毛壳菌(C. globosum)进行诱导,运用DNS法连续10 d测定发酵液中葡聚糖酶活性。结果表明,以立枯丝核菌(R. solani)、尖孢镰刀菌(F. oxysporum)、叶枯病菌(S. tritici)、杨树烂皮病菌(V. sordida)细胞壁诱导条件下,在诱导的1 d~14 d,β-1,3-葡聚糖酶活性缓慢增加,第15 d开始,酶活性表现为迅速升高后缓慢下降的趋势。其中以叶枯病菌(S. tritici)诱导产生的酶活性最高,最高酶活性为1.928 U。CHI46毕赤酵母转化子粗酶液对水稻稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)进行抑菌试验,研究粗酶液抑制病原菌菌落生长、孢子产生及芽管伸长情况。结果表明,病原菌菌落生长抑制率为32.9%;1 cm取样处孢子产生抑制率为80.1%,2 cm取样处孢子产生抑制率为82.21%;在处理浓度为50μl/ml、100μl/ml、150μl/ml的孢悬液中芽管伸长最大抑制率分别为25%、58.33%、77.78%,粗酶液抑菌效果良好,能够有效的抑制稻瘟病菌(P. oryzae)的生长。
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