论文部分内容阅读
目的:癌症是世界上最具有威胁性的疾病之一,其中肝癌发生率及死亡率都排在前几位。临床药物索拉非尼(sorafenib,S)是治疗肝癌的有效药物之一,然而,依然存在水溶性差、生物利用度低等问题。因此,本研究基于CRISPR基因编辑技术,构建靶向表皮生长因子受体的重组质粒(E),合成anti-EpCAM适配体(aE)与聚酰胺-胺(PAMAM,P)的偶联物(P-aE),并制备其修饰的中空介孔二氧化硅(HMSN,HM)共载索拉非尼与质粒的多功能靶向纳米递送系统(SE@HM/P-aE),以提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性并高效地抑制肿瘤生长。方法:首先,优化HMSN合成条件制备粒径合适的羧基化HMSN纳米,通过物理方法装载索拉非尼,并通过静电作用连接适配体功能化的PAMAM(P-aE),构建S@HM/P-aE纳米递送系统。设计EGFR-sgRNA并构建质粒,采用AO/EB法和western-blot验证其生物学活性,并将其装载在S@HM/P-aE纳米中制备SE@HM/P-aE纳米药物。采用透射电镜、粒径仪、原子力显微镜、红外光谱仪等对纳米粒进行表征;高效液相法建立索拉非尼的标准曲线,并测定索拉非尼的载药量、包封率及累积释放量。MTT法初步检测纳米载体及纳米药物对细胞的毒性作用。建立昆明鼠H22细胞移植瘤模型,研究体内的抗肿瘤效果,HE染色检测纳米药物的毒副作用,免疫组化探究SE@HM/P-aE纳米药物提高肿瘤细胞对索拉非尼的敏感性的机制。结果:本研究制备的SE@HM/P-aE纳米药物粒径均一,均在200nm以下,具有一定的pH响应性:摄取实验证实适配体靶向修饰的纳米药物SE@HM/P-aE可以显著增强药物的摄取量;体外生物学实验表明SE@HM/P-aE纳米药物可以增强索拉非尼与EGFR-sgRNA/Cas9质粒的协同抑制肿瘤细胞增殖作用,并促进细胞的凋亡;体内实验进一步证明纳米药物具有较好的生物相容性和较低的毒副作用,可有效地抑制肿瘤的生长。结论:本研究成功设计并合成的共载化疗药物索拉非尼与EGFR-sgRNA/Cas9质粒多功能靶向递送系统,能够改善索拉非尼的水溶性及药物的靶向性肿瘤细胞对索拉非尼的敏感性。体内研究证实SE@HM/P-aE纳米药物的显著抗肿瘤效果,及较低的毒副作用,并揭示药物的作用机制,为肿瘤治疗提供了新思路。