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生地黄经炮制变成熟地黄,由一种清热凉血药变成一种补益药。前期研究表明熟地黄炮制过程中发生了美拉德反应,产生大量5-羟甲基糠醛(5-HMF),同时还原糖含量大幅度增加;经酵母菌发酵后其中5-HMF和小分子糖类被降解,对大鼠Ⅰ型糖尿病并发症的预防效果得到改善。这一结果提示5-HMF和小分子糖类可能不是熟地黄的有效成分,但是文献报道5-HMF和地黄寡糖具有多种生物活性。究竟5-HMF和地黄寡糖对熟地黄功效是否有贡献,需要进一步研究。本研究在前期研究的基础上,进一步评价酵母菌发酵对熟地黄生物活性的影响。主要内容如下:(1)熟地黄、发酵熟地黄和5-HMF对甲氨蝶呤化疗所致大鼠急性肝肾损伤的影响。结果发现熟地黄和发酵熟地黄均显著降低血清谷草转氨酶、血尿素氮、尿糖、尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)的含量;而5-HMF仅显著降低尿NAG含量,对其它指标影响不显著。(2)长时间饲喂含熟地黄、发酵熟地黄和5-HMF饲料对正常大鼠的影响。发现熟地黄使大鼠尿液钙、镁和钠离子排出增加,粪便颗粒变大,排便量及粪氮排出量增加,而发酵熟地黄和5-HMF影响不显著。(3)5-HMF与人血清白蛋白的结合规律。荧光光谱法揭示5-HMF与白蛋白孵育不同时间,计算所得的结合位点数相似,均稍大于1;而HPLC检测发现5-HMF与白蛋白随时间增加其结合量逐渐增加,剩余5-HMF与孵育时间之间的关系符合反S型曲线;此外,质谱检测表明5-HMF与白蛋白的结合属于非共价结合。本论文结果表明:酵母菌发酵不影响熟地黄肝肾保护活性,小分子糖类和5-HMF不是熟地黄该作用的主要活性成分。小分子糖类可能与熟地黄致泻副作用有关,而5-HMF可能影响白蛋白的生物功能。本研究结果支持熟地黄经酵母菌发酵后应用。