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卵黄蛋白(Vitellin, Vn)是卵黄的主要成分,在雌性对虾性腺成熟过程中合成,为胚胎和幼体早期发育提供营养。本文对中国明对虾卵黄蛋白及其前体卵黄蛋白原(Vitellogenin, Vg)的生化特征进行了研究,并克隆了Vg的全长cDNA序列。利用凝胶过滤(SephadexG-150)、离子交换(DEAE-Cellulose-32)以及电洗脱等方法纯化了中国明对虾Vn和Vg。Vn是一种糖脂磷类胡萝卜素蛋白,总分子量409 ku,等电点5.4,含糖量8.7%,具有5个亚基(202 ku、171 ku、105ku、80 ku和73 ku),亚基之间有1个二硫键。Vg也是一种糖脂磷类胡萝卜素蛋白,总分子量476 ku,等电点5.2,含糖量11.6%,亚基之间未发现二硫键。利用纯化的Vn免疫家兔制备抗血清。此抗血清能与对虾属内不同个体Vn或Vg发生免疫反应,但与属外个体间无此特性。免疫组织学观察证明对虾外源性Vg产生于肝胰腺,经血淋巴、滤泡细胞的转运,最终被卵母细胞吸收,加工成Vn。采用ELISA方法检测了对虾卵及无节幼体对Vn的利用过程。卵子排出后卵及幼体体内卵黄蛋白含量不断减少,N3-4至N5-6期和N5-6至Z1期两个时期Vn的消耗量最大,分别为1322 ng／mL和1213 ng／mL,占卵中卵黄蛋白总量的38.9%和35.7%,Z1期以后体内基本不含卵黄蛋白。通过同源克隆和RACE等方法从成熟中国明对虾卵巢中克隆到了一条VgcDNA序列。全长7956 bp,含有一个7761 bp的开放阅读框(ORF),编码2587个氨基酸残基。推导的氨基酸序列与其他已知甲壳动物Vg具有80-95%的同一性(identity)。其中,中国明对虾和墨吉明对虾Vg分子的亲缘关系最近。SingalP程序预测Vg前体N末端含有18个氨基酸残基的信号肽。其余2569个氨基酸中含有一个RXRR分裂位点,此位点能被枯草杆菌样蛋白内切酶(subtilisin-like endoproteases)所识别并裂解。推导的Vg的理论分子量是282 ku,理论等电点为6.13。氨基酸含量分析显示,Vg蛋白含有较多的Ala(11.56%)、Glu(8.99%)、Val(8.52%)和Ile(7.12%)。RT-PCR方法检测到Vg基因同时存在于雌性和雄性对虾基因组中,但其转录只发生在卵黄形成期的雌性对虾的卵巢和肝胰腺中。