论文部分内容阅读
乙肝病毒表面抗原PreS1区具有丰富的生物学功能和较强的免疫源性。本论文首先将通过PCR方法获得的PreS1(1-65)基因导入谷胱甘肽巯基转移酶融合表达载体pGEX 4T—1,构建了tac启动子控制下的GST—PreS1(1-65)融合蛋白的表达质粒,并在大肠杆菌中得到了可溶性表达,其表达量约占菌体总蛋白的20%左右,进一步利用NBS—BIOFLOW3000型发酵罐进行恒溶氧分批补料培养,达到了每升约50克湿菌和1.2克融合蛋白的产率。本文还初步建立了利用色谱法从经凝血酶酶切后的融合蛋白中获取PreS1肽段的方法,纯化后PreS1(1-65)肽段经HPLC检测纯度达95%以上。产物的化学结构除有表达基因的DNA序列测定以外,还经质谱分析和N端氨基酸序列测定证明,其抗原性则由Western—blot、间接ELISA法得到了验证。 本研究论文还研究了利用乙肝病毒表面抗原PreS1对肝细胞具有专一亲和性和人肿瘤坏死因子具有抗肿瘤活性这两方面的特点,通过PCR方法获得B细胞和T细胞抗原决定簇以及肝细胞结合的全部位点在内的PreS1(1-65)肽段基因,并用PCR法改造肿瘤坏死因子(hTNFα)基因,消除了hTNFα基因的终止密码子后,克隆到表达载体PSB—92中,构建了P_L启动子控制下的hTNFα-preS1(1-65)融合蛋白表达质粒,序列分析