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植物类黄酮化合物具有抗氧化、降血脂、抗衰老、治疗心血管疾病等保健功能。本文以菠萝皮为材料,对菠萝皮中类黄酮化合物的提取工艺和分离纯化条件进行了优化,通过颜色反应法,紫外吸收光谱法来初步鉴定菠萝皮中的类黄酮化合物,并研究其抗氧化和降血脂功能活性,为开发和利用这一资源提供理论依据。
1.采用铝盐-分光光度法测定菠萝皮中类黄酮物质的含量,用芦丁标准品作为标准对照物,测定波长为510nm,显色后15分钟内进行吸光值测定;芦丁标准工作曲线的标准方程为:Y=0.0072X+0.0038,相关系数R2=0.9995(R2>0.95);菠萝皮总类黄酮含量为24.46mg/g。
2.对菠萝皮中类黄酮的最佳提取条件进行了研究采用溶剂提取法、超声波提取法和纤维素酶法提取三种方法,综合考虑确定了超声波提取是最佳的提取方法,确定了60%(v/v)乙醇,料液比1:50(w/v),浸提时间0.5小时,温度70℃,功率350W为菠萝皮中类黄酮的最佳浸提条件。在此条件下所得浸提液每克菠萝皮中含有黄酮21.3 mg,则可得其浸提率为87.08%。
3.在得到类黄酮化合物粗提液后,对粗提液中的类黄酮化合物的纯化方法进行了探索,结果表明AB-8型大孔吸附树脂对菠萝皮类黄酮有较好的吸附分离性能,采用吸附流速为1mL/min,上样液浓度为2.25mg/mL,原液pH值为6,洗脱剂为90%乙醇溶液,洗脱流速为0.5mL/min,洗脱剂用量为200mL,为最佳纯化条件,经过AB-8型大孔吸附树脂精制后,产品中类黄酮物质的纯度为35.65%,精制倍数达3.32,回收率为82.79%。纯化后的样品通过颜色反应法及紫外吸收光谱法初步鉴定,确定为黄酮类或黄酮醇类化合物。
4.利用Schaal烘箱法检测菠萝皮类黄酮纯品(PPF)对油脂过氧化值的影响,同时通过邻苯三酚自氧化法检测PPF对超氧阴离子的清除能力;考察PPF对羟自由基的清除能力,初步探讨PPF抗氧化功效。结果显示:PPF具有一定的抗氧化功效,添加0.7%PPF的猪油过氧化值最低,效果最佳;菠萝皮类黄酮粗品(CPPF)和PPF对超氧阴离子均具有一定的清除作用,量效成正相关,当CPPF浓度达0.7 mg/mL时,抑制率达15.96%;当PPF浓度达0.402 mg/mL时,抑制率达41.18%;PPF对羟自由基具有一定的清除作用,当其浓度为0.13 mg/mL的PPF清除能力最强,清除率达到59.87%。
5.通过建立实验小鼠高血脂症模型,探讨菠萝皮类黄酮降血脂效果。结果显示不同剂量组的菠萝皮类黄酮具有调节血脂的作用,能显著降低血清总胆固醇(P<0.01)及甘油三酯(P<0.01)及低密度脂蛋白胆固醇(P<0.01)的含量,并可提高高密度脂蛋白胆固醇(P<0.05)的含量。