酶活力不可逆抑制动力学不仅对于阐明酶的作用机制、代谢途径、调控机制等生物化学的基础理论问题具有重要意义,而且在药理学、毒理学等方面具有广阔的应用前景。1965年,邹承鲁教授对单底物酶活性不可逆抑制动力学进行了系统的理论研究。邹氏方法可以应用于双底物酶、偶联酶、滞后酶等多种酶反应体系,其主要优点在于可以通过一个简单的实验求得酶活力不可逆抑制的表观速度常数,还可以了解底物对抑制过程的影响。本文的主要工作是将底物反应法应用于中华仓鼠二氢叶酸还原酶的盐酸胍、脲变性和对氯汞苯甲酸修饰激活动力学研究。虽然酶活力不可逆抑制的动力学理论已经被推广应用于变性剂作用下的酶失活动力学研究,但以往的研究忽略了一个与测定失活速度常数相关的重要问题。在大多数蛋白质变性实验中,高浓度的变性剂可能对酶反应体系的动力学行为有很大影响,因此在没有变性剂存在时测定的动力学参数不再适用。我们在第二章中推导了变性剂存在下的底物反应动力学方程,并在考虑了高浓度盐酸胍对酶催化反应米氏常数的影响的前提下,根据推导的动力学方程重新分析了盐酸胍存在下木瓜蛋白酶的失活动力学,结果表明底物对木瓜蛋白酶的失活没有保护作用。在第三、四两章中,我们将酶活性不可逆抑制底物反应动力学理论应用于中华仓鼠二氢叶酸还原酶的脲和盐酸胍失活动力学研究。我们根据在脲或盐酸胍存在下的底物反应动力学方程求得游离酶和酶底物二元、三元复合物的微观动力学常数,结果表明:酶-底物二元、三元复合物的失活速度明显慢于游离酶,说明两个底物二氢叶酸和NADPH对酶的失活都具有一定程度的保护作用; 在脲作用下,酶的失活和构象变化均为单指数项过程,而且酶的活力丧失和三级结构变化是同时发生的,说明二氢叶酸还原酶的脲变性可能是一个“全或无”的两态过程; 在盐酸胍作用下,酶的构象变化为两相过程,而失活则是单指数项过程,酶分子构象变化的快相速度常数与失活速度常数基本一致,因此我们认为二氢叶酸还原酶的盐酸胍变性过程中存在一个没有活力、但仍具备一