背景缺血性脑血管疾病(Ischemic cerebral vascular disease,ICVD)隶属中医“中风病”范畴,是一种临床常见的急危重病,严重威胁着人类健康。随着我国人口的老龄化,中风病的发病率也显著增加,由于饮食结构、生活习惯的改变,青年人中风的比例也在增加。脑梗死的发病多与动脉粥样硬化有关,动脉粥样硬化斑块的增生、破损、栓子脱落导致血管腔严重狭窄或闭塞,出现局限性脑功能障碍。目前,大量的研究集中于如何挽救处于缺血半暗带中的脑细胞,侧枝循环的开放、建立,缺血区血运的重建,血管的新生成了研究的焦点问题。内皮祖细胞(endothelial Progenitor cell,EPCs)作为成年干细胞中的一种,可以分化为成熟的内皮细胞并参与血管的新生,EPCs通过加速血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的修复和促进神经元的生长,起到促进患者神经功能恢复的作用。有研究报道单核细胞和CD31细胞能够归巢到缺血创伤区,进入微血管内皮组织,变为成熟的血管内皮细胞。本课题前期的临床研究表明,健脾补肾活血方能够提高脑梗死患者的日常生活活动能力,临床疗效明显。因此,本课题在以前临床研究的基础上,以SPF级雄性SD大鼠为研究对象,制作大鼠MCAO局灶性脑缺血再灌注模型,从大鼠神经功能评分、各组大鼠脑梗死面积比、大鼠外周血EPCs占外周血单个核细胞的百分率、大鼠脑组织内皮细胞的特异性标记物CD31抗原的蛋白表达情况等方面探讨具有扶正固本作用的健脾补肾活血方动员EPCs向缺血损伤区归巢的规律,阐明其内源性脑保护机制,同时,通过探讨健脾补肾活血方对脑缺血大鼠损伤后不同时间点各项指标的影响,以寻求最佳干预时间窗,为临床用药提供科学依据。目的1、通过探讨健脾补肾活血方动员EPCs向缺血损伤区归巢的规律,阐明其内源性脑保护机制。2、通过比较各组大鼠I/R后不同时间点的神经功能评分、脑梗死面积比、外周血EPCs及脑组织CD31蛋白表达情况,以寻求最佳干预时间窗。方法雄性SD大鼠(250-300g)144只,随机分为中药组、西药组、模型组和假手术组,参照Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型(MCAO),各组均设缺血/再灌注3h、6h、1d、3d、7d、14d共6个观察时间点(假手术组按相同时间点观察),每组每时间点6只。药物组造模前5d及造模后观察期间按1ml/100g分别灌胃尼莫地平混悬液和健脾补肾活血方药液。根据Longa的5级标准评分法测定神经功能评分;TTC染色法测定大鼠脑梗死面积观比;经流式细胞仪检测大鼠外周血EPCs百分率;运用免疫组化法检测大鼠脑组织内皮细胞的特异性标记物CD31抗原的蛋白表达情况。结果各组大鼠相应时间点神经功能评分比较,假手术组各时间点大鼠神经功能评分均低于其余三组(P<0.05)。各组大鼠I/R14d、7d、1d、6h、3h神经功能评分均低于I/R3d(P<0.05);I/R14d、3h神经功能评分均低于I/R7d、1d、6h(P<0.05);I/R14d神经功能评分低于I/R3h(P<0.05);I/R6h、3h神经功能评分低于I/R1d(P<0.05);I/R3h神经功能评分低于I/R6h(P<0.05)。健脾补肾活血方组、尼莫地平组神经功能评分均低于模型组(P<0.05);健脾补肾活血方组神经功能评分低于尼莫地平组(P<0.05)。除假手术组外,I/R 3d脑梗死面积较I/R14d、7d、1d、6h、3h增大(P<0.05);I/R14d脑梗死面积较I/R7d、1d、6h、3h减小(P<0.05);I/R7d、1d脑梗死面积较I/R6h、3h增大(P<0.05);I/R7d脑梗死面积较I/R1d增大(P<0.05)。各组大鼠同一时间点比较,健脾补肾活血方组、尼莫地平组、模型组脑梗死面积均较假手术组增大(P<0.05);模型组脑梗死面积较健脾补肾活血方组、尼莫地平组增大(P<0.05);尼莫地平组脑梗死面积较健脾补肾活血方组增大(P<0.05)。大鼠在I/R7d之前,外周血中EPCs的表达基本呈递增趋势,I/R14d较前有所递减。各组大鼠I/R14d、3d、1d、6h、3h外周血中EPCs均低于I/R7d(P<0.05);I/R3h、6h、1d外周血中EPCs均低于I/R3d、14d(P<0.05);I/R3d外周血中EPCs低于I/R14d(P<0.05)。各组相应时间点比较,假手术组外周血中EPCs的表达均低于同期的模型组、尼莫地平组、健脾补肾活血方组(P<0.05);模型组外周血中EPCs的表达低于同期的尼莫地平组、健脾补肾活血方组(P<0.05);尼莫地平组外周血中EPCs的表达低于同期的健脾补肾活血方组(P<0.05)。各组各个时间点(除I/R14d)大鼠脑组织中CD31的表达基本呈递增趋势。各组大鼠I/R14d、3d、1d、6h、3h脑组织中CD31均低于I/R7d(P<0.05);I/R3h、6h、1d脑组织中CD31均低于I/R3d、14d(P<0.05);I/R14d脑组织中CD31低于I/R3d(P<0.05)。各组相应时间点比较,假手术组脑组织CD31的表达均低于同期的模型组、尼莫地平组、健脾补肾活血方组(P<0.05);模型组脑组织中CD31的表达低于同期的尼莫地平组、健脾补肾活血方组(P<0.05);尼莫地平组脑组织中CD31的表达低于同期的健脾补肾活血方组(P<0.05)。结论1、健脾补肾活血方可明显改善缺血/再灌注大鼠的神经功能评分,缩小脑梗死面积;2、健脾补肾活血方可显著提高缺血/再灌注大鼠外周血中EPCs的水平;3、健脾补肾活血方可显著增强缺血/再灌注大鼠脑组织中CD31抗原的表达;4、缺血/再灌注大鼠3d、7d的神经功能评分最高,脑梗死的面积最大,外周血中EPCs及脑组织CD31抗原在7d表达最高;5、健脾补肾活血方改善缺血/再灌注大鼠的神经功能评分,缩小脑梗死的面积可能与其增加外周血中EPCs的水平、增强脑组织CD31抗原的表达等促进脑组织新生血管的形成、侧枝循环的建立有关。